【摘要】：綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)是引起綿羊和山羊增生性、間質(zhì)性胸膜肺炎的主要病原。本試驗(yàn)研究對(duì)呼和浩特地區(qū)MO進(jìn)行了分離鑒定,為進(jìn)一步開(kāi)展MO研究及疫苗的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。從內(nèi)蒙古呼和浩特市郊區(qū)某屠宰場(chǎng)中挑選持續(xù)咳嗽、流涕并伴有高熱的疑似患有綿羊支原體肺炎的綿羊,采集鼻拭子及肺臟共70份病料,處理后接種到改良Hayflick培養(yǎng)基中進(jìn)行分離培養(yǎng),經(jīng)純化培養(yǎng)后得到7株分離菌株(HSj-1、HSj-2、HSj-3、HSj-4、HSj-5、HSj-6、HSj-7)。對(duì)7株分離菌株做培養(yǎng)特性鑒定、生化學(xué)鑒定、血清學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定,確定7株分離菌株為MO。將形態(tài)典型、長(zhǎng)勢(shì)良好的2個(gè)分離菌株(HSj-1、HSj-6),根據(jù)文獻(xiàn)合成一對(duì)可擴(kuò)增1493bp片段的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果參考株Y-98和分離株HSj-6、HSj-1均在預(yù)期處出現(xiàn)一條明顯的條帶。將電泳條帶凝膠回收保存后送公司測(cè)序,與參考株的同源性分別為99%和97%。對(duì)1:6比例傳代培養(yǎng)第5代的HSj-1、HSj-6MO分離株,采用CFU和CCU計(jì)數(shù)法從Oh開(kāi)始,每6h進(jìn)行一次測(cè)定,記錄數(shù)據(jù)并繪制生長(zhǎng)曲線。結(jié)果表明兩株MO在實(shí)驗(yàn)室中的傳代比例為1:6時(shí)最高菌量可達(dá)109CCU及6.1×109CFU/mL,最佳收獲時(shí)間為接種后100h左右,其中HSj-6株生長(zhǎng)性能、生長(zhǎng)速度優(yōu)于MO菌株平均生長(zhǎng)水平,為后續(xù)試驗(yàn)研究及疫苗研發(fā)提供了可供選擇的MO菌株。
【圖文】：

３．１分離菌菌落的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果逡逑眼觀菌落形態(tài)：取穩(wěn)定傳代５代以上的分離菌株按不同比例接種于固體培養(yǎng)基上，逡逑將其置于Ｃ０２培養(yǎng)箱３７°Ｃ培養(yǎng)５？７ｄ后取出，肉眼可見(jiàn)針尖大小乳白色菌落，，如圖１逡逑所示；在顯微鏡４0ｘ下觀察固體培養(yǎng)基上菌落呈無(wú)中心臍的“桑甚狀”，如圖２所示。逡逑■邋Ａ：邋１「Ｉ逡逑圖１分離菌菌落邐圖２顯微鏡下分離菌菌落形態(tài)（４０邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｅｙｅ邋ｖｉｅｗ邋ｏｆ邋ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ邋ｃｏｌｏｎｉｅｓ邐Ｆｉｇ．２邋ＭＯ邋ｓｈａｐｅ邋ｕｎｄｅｒ邋ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋（４０ｘ）逡逑經(jīng)過(guò)姬姆薩染液染色后，在１０００Ｘ油鏡下觀察，分離菌菌體著色良好，形態(tài)不規(guī)逡逑貝ＩＪ，多為桿狀、球狀顆粒，如圖３所示。逡逑丨壚屸Ｖ，：．＇逡逑＊邋＾邋．：．－＇＇＇逡逑？邐＊邐Ｓ逡逑．／邋．Ｖ邋一．邋＊＇＇邋；邋Ｉ逡逑—逡逑ｒ＾逡逑圖３分離菌姬姆薩染色結(jié)果（１０００邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｇｉｅｍｓａ邋ｏｉｌ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（１０００ｘ）逡逑

眼觀菌落形態(tài)：取穩(wěn)定傳代５代以上的分離菌株按不同比例接種于固體培養(yǎng)基上，逡逑將其置于Ｃ０２培養(yǎng)箱３７°Ｃ培養(yǎng)５？７ｄ后取出，肉眼可見(jiàn)針尖大小乳白色菌落，如圖１逡逑所示；在顯微鏡４0ｘ下觀察固體培養(yǎng)基上菌落呈無(wú)中心臍的“桑甚狀”，如圖２所示。逡逑■邋Ａ：邋１「Ｉ逡逑圖１分離菌菌落邐圖２顯微鏡下分離菌菌落形態(tài)（４０邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｅｙｅ邋ｖｉｅｗ邋ｏｆ邋ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ邋ｃｏｌｏｎｉｅｓ邐Ｆｉｇ．２邋ＭＯ邋ｓｈａｐｅ邋ｕｎｄｅｒ邋ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋（４０ｘ）逡逑經(jīng)過(guò)姬姆薩染液染色后，在１０００Ｘ油鏡下觀察，分離菌菌體著色良好，形態(tài)不規(guī)逡逑貝ＩＪ，多為桿狀、球狀顆粒，如圖３所示。逡逑丨壚屸Ｖ，：．＇逡逑＊邋＾邋．：．－＇＇＇逡逑？邐＊邐Ｓ逡逑．／邋．Ｖ邋一．邋＊＇＇邋；邋Ｉ逡逑—逡逑ｒ＾逡逑圖３分離菌姬姆薩染色結(jié)果（１０００邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｇｉｅｍｓａ邋ｏｉｌ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（１０００ｘ）逡逑
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.26

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2667751