本文關(guān)鍵詞：草莓莖尖超低溫療法脫毒技術(shù)體系的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：草莓(Fragaria×ananassa Duch.)是薔薇科(Rosaceae)草莓屬(Fragaria)多年生草本植物。其果實鮮嫩多汁、色澤艷麗、香氣怡人、口感酸甜適中,是我國傳統(tǒng)的優(yōu)秀漿果果品之一。其繁殖主要采用傳統(tǒng)的分株繁殖或匍匐莖埋壓,這種無性繁殖的方式提高了病毒侵染植株的幾率。避免病毒給生產(chǎn)帶來巨大的經(jīng)濟損失,實現(xiàn)草莓無病毒苗栽培生產(chǎn)化,必將是我國草莓業(yè)目前勢在必行的發(fā)展趨勢和目標。而超低溫療法是一種新型、高效脫除植物病毒的新技術(shù),備受各研究科學(xué)者的親睞。本試驗以‘紅顏’草莓(Fragaria×ananassa Duch.cv. Benihoppe)品種大田莖尖為試驗材料,對超低溫療法關(guān)鍵程序(預(yù)培養(yǎng)、預(yù)處理和化凍條件)進行了篩選和優(yōu)化,并以莖尖脫毒法為對照,建立起完善的超低溫療法脫毒技術(shù)體系。在此基礎(chǔ)上,研究者對多重RT-PCR病毒檢測體系相關(guān)參數(shù)(Mg2+濃度、引物濃度、PCR程序等)進行了優(yōu)化和改進,以期建立完善的多重RT-PCR病毒檢測體系。最后利用DNA相關(guān)軟件篩選分析SSR-PCR引物,分析超低溫療法脫毒苗遺傳性狀的穩(wěn)定性,實驗結(jié)果如下：1.適合‘紅顏’草莓苗的超低溫療法脫毒技術(shù)體系為：在含0.3 mo.L一預(yù)培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)7 d,室溫下LS裝載60 min,0℃下PVS2脫水1 h,液氮處理1 h,40℃水浴化凍120 s,用含1.2 mol·L-1蔗糖的液體MS培養(yǎng)基洗滌兩次,每次10 mmin。該體系同時脫除草莓四種主要病毒(草莓鑲脈病毒、草莓輕型黃邊病毒、草莓皺縮病毒和草莓斑駁病毒)的比率高達100%,成活率為69.03%。將該體系再用于‘蜀豐’‘豐香’以及‘章姬’,其存活率分別為68.15%、71.00%和69.78%,達到預(yù)期的試驗?zāi)繕恕?.適用于多重RT-PCR檢測體系的引物是SC1/SC2、SM1/SM2、SY1/SY2、 SV1/SV2、A1/A2,目的片段大小分別是345 bp、394 bp、861 bp、271 bp和295 bp；多重RT-PCR病毒檢測體系是1μl cDNA、2 μl 10×PCR bufer、2.0 mmol·L-1 MgCl2、 0.2 mmol·L-1 dNTPs、0.5UTaq酶,引物濃度0.2 μmol·L-1 (SCV 0.25 μmol·L/1),最后用超純水補至20μl; PCR程序：94℃預(yù)變性3 min,94℃變性1 min,55℃退火40 s,68℃延伸40s,35個循環(huán),72℃再延伸5 min。
【關(guān)鍵詞】：草莓 莖尖 超低溫療法 多重PCR
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S668.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1. 文獻綜述9-17
• 引言9-10
• 1.1 超低溫療法的研究進展10-11
• 1.2 超低溫療法的原理11-12
• 1.3 冷凍療法操作程序12-15
• 1.3.1 材料選擇13
• 1.3.2 材料預(yù)培養(yǎng)13
• 1.3.3 材料預(yù)處理13-14
• 1.3.4 化凍和洗滌14-15
• 1.4 四種常見草莓病毒檢測方法的研究15-16
• 1.4.1 指示植物小葉嫁接法檢測15
• 1.4.2 血清學(xué)檢測15
• 1.4.3 分子生物學(xué)檢測15-16
• 1.5 超低溫療法后再生植株遺傳穩(wěn)定性的檢測16-17
• 2. 材料與方法17-25
• 2.1 材料17-19
• 2.1.1 植物材料17
• 2.1.2 試驗試劑和溶液17-18
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備18-19
• 2.2 技術(shù)路線19
• 2.3 試驗方法19-25
• 2.3.1 超低溫療法脫毒技術(shù)體系的建立19-22
• 2.3.2 病毒檢測體系的建立22-25
• 2.3.3 草莓脫毒效果檢測25
• 2.3.4 超低溫療法的應(yīng)用25
• 3 結(jié)果與分析25-39
• 3.1 超低溫保存脫毒技術(shù)體系的建立和優(yōu)化25-32
• 3.1.1 外植體的建立26-27
• 3.1.2 培養(yǎng)基蔗糖濃度對草莓莖尖超低溫保存后成活率的影響27
• 3.1.3 暗培養(yǎng)時間對草莓莖尖超低溫保存后成活率的影響27-28
• 3.1.4 預(yù)處理對草莓莖尖超低溫保存后成活率的影響28-29
• 3.1.5 化凍時間對草莓莖尖超低溫保存后成活率的影響29
• 3.1.6 莖尖長度對草莓莖尖超低溫保存后成活率的影響29-30
• 3.1.7 超低溫保存正交試驗結(jié)果30-31
• 3.1.8 莖尖恢復(fù)培養(yǎng)與植株再生31-32
• 3.2 草莓病毒檢測32-39
• 3.2.1 引物篩選結(jié)果32
• 3.2.2 單一RT-PCR檢測結(jié)果32-33
• 3.2.3 單一RT-PCR檢測結(jié)果33-34
• 3.2.4 多重RT-PCR檢測體系的建立34-37
• 3.2.5 再生苗病毒檢測結(jié)果37-39
• 3.3 脫毒苗移栽定植39
• 4 結(jié)果討論39-42
• 4.1 超低溫療法脫毒技術(shù)體系的優(yōu)化39-40
• 4.2 無病毒苗恢復(fù)培養(yǎng)基的選擇40
• 4.3 多重RT-PCR病毒檢測體系的優(yōu)化40-41
• 4.4 脫毒效果檢測41-42
• 4.5 再生苗遺傳穩(wěn)定性分析42
• 5 小結(jié)42-43
• 6 展望43-44
• 參考文獻44-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果50-51
• 致謝51

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本文編號：261459