發(fā)布時(shí)間：2019-08-09 16:00

【摘要】：奶牛乳腺炎(Bovine mastitis)主要是由乳腺受細(xì)菌感染而導(dǎo)致的炎癥。引發(fā)奶牛乳腺炎的細(xì)菌多種多樣,目前已發(fā)現(xiàn)約150多種,其中金黃色葡萄球菌是致使奶牛患乳腺炎的主要原因之一。金黃色葡萄球菌黏附上皮細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)蛋白被認(rèn)為是早期感染的關(guān)鍵,而纖連結(jié)合蛋白B(FnBPB)和凝集因子A(ClfA)是奶牛感染金黃色葡萄球菌引起乳腺炎的重要黏附因子。FnBPB的D區(qū)(FnBPB-D)和ClfA的A區(qū)(ClfA-A)是其黏附的重要功能區(qū)。Fc受體在豬、反芻動(dòng)物等乳腺中表達(dá),能夠與IgG的Fc片段直接結(jié)合運(yùn)輸IgG,使IgG維持穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)平衡。因此本研究針對(duì)金黃色葡萄球菌性奶牛乳腺炎,在本實(shí)驗(yàn)室過(guò)去的研究基礎(chǔ)上,制備了 Fc-FnBPB-ClfA亞單位疫苗,并分別配合鋁鹽佐劑及1%鹽酸左旋咪唑佐劑以不同免疫方式對(duì)奶牛進(jìn)行免疫,評(píng)價(jià)其免疫效果。以鹽酸左旋咪唑(LMS)或氫氧化鋁(ALUM)為佐劑與純化的重組蛋白(bFc-FnBPB-ClfA)混合以首次免疫肌肉注射,加強(qiáng)免疫乳頭管灌注或首次免疫、二次免疫及三次免疫均以肌肉注射方式免疫臨近干奶期的奶牛。用間接ELISA法檢測(cè)各組牛血清及初乳乳清中的抗體水平。結(jié)果表明:以LMS為佐劑免疫的(A組)牛血清滴度最高可達(dá)到1:1600,乳清滴度達(dá)到1:400;而以ALUM為佐劑免疫的B組血清效價(jià)為1:800,乳清效價(jià)為1:200;C組血清抗體滴度為1:400,乳清效價(jià)為1:200。在奶牛產(chǎn)犢后30d、45d及60d對(duì)其乳汁進(jìn)行CMT檢測(cè),免疫組多數(shù)奶牛乳樣體細(xì)胞數(shù)在0-2萬(wàn)個(gè)/mL,而對(duì)照組中奶牛乳樣體細(xì)胞數(shù)則50萬(wàn)個(gè)/mL,證明疫苗有較好的預(yù)防效果。采集奶牛乳汁,免疫前試驗(yàn)組奶牛乳汁中金黃色葡萄球菌分離率為85%,免疫后分菌率降低到15%,說(shuō)明該疫苗同時(shí)具有治療的作用。本研究結(jié)果表明,以首次免疫肌肉注射,加強(qiáng)免疫乳頭管灌注的方式較好并且bFc-FnBPB-ClfA與LMS佐劑混合后免疫奶牛能最有效激發(fā)奶牛免疫反應(yīng)。
【圖文】：

１邋００邐．逡逑７0邋？．邐７８ｋＤａ逡逑１４逡逑圖３邋目的蛋白Ｆｃ－ＦｎＢＰＢ－ＣＩｆＡ純化逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋Ｆｃ－ＦｎＢＰＢ－ＣｌｆＡ逡逑Ｍ：邋Ｐｒｏｔｅｉｎ邋Ｍａｒｋｅｒ邋１邋：邋Ｅｌｕｔａｎｔ邋ｏｆ邋Ｆｃ－ＦｎＢＰＢ－ＣｌｆＡ邋ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ逡逑目的蛋白的濃縮及濃度測(cè)定逡逑上清蛋白經(jīng)Ｎｉ－ＮＴＡ邋Ｒｅｓｉｎ層析柱純化后經(jīng)透析袋濃縮，ＢＣＡ法測(cè)定．７３９ｍｇ／ｍＬ。逡逑６００邋－逡逑

圖３邋目的蛋白Ｆｃ－ＦｎＢＰＢ－ＣＩｆＡ純化逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋Ｆｃ－ＦｎＢＰＢ－ＣｌｆＡ逡逑ｎ邋Ｍａｒｋｅｒ邋１邋：邋Ｅｌｕｔａｎｔ邋ｏｆ邋Ｆｃ－ＦｎＢＰＢ－ＣｌｆＡ邋ｓｕ度測(cè)定逡逑Ｒｅｓｉｎ層析柱純化后經(jīng)透析袋濃ｙ＝７９０．９９ｘ－６４．６４邋S緬義希遙插澹藉澹�，９９５逦／辶x希俊危，

本文編號(hào)：2524877