【摘要】：本試驗(yàn)以番茄早疫病原菌(Alternaria solani)、灰霉病原菌(Botrytis cinerea)為靶標(biāo)病菌,對(duì)從多年種植番茄的園藝大棚土壤中分離和篩選到抑菌效果較好的生防細(xì)菌菌株S6。通過(guò)菌株形態(tài)特征、生理生化試驗(yàn)結(jié)合分子生物學(xué)分析對(duì)菌株S6進(jìn)行鑒定,對(duì)菌株S6的不同營(yíng)養(yǎng)條件和不同培養(yǎng)條件篩選、拮抗物質(zhì)的分離純化及其抑菌機(jī)制初步研究。得到結(jié)果如下:1.通過(guò)對(duì)菌株S6的形態(tài)特征觀察、生理生化試驗(yàn)及分子生物學(xué)分析,菌株S6鑒定為貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)。2.通過(guò)菌株S6生長(zhǎng)曲線的測(cè)定,培養(yǎng)16 h的菌液最合適做種子液;采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)菌株S6的營(yíng)養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化后培養(yǎng)基組合為葡萄糖2%,酵母浸粉0.5%,KCl 0.75%,1000 mL蒸餾水;采用單因素試驗(yàn)對(duì)菌株S6的培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,最佳培養(yǎng)條件為培養(yǎng)時(shí)間3 d,培養(yǎng)溫度30℃,搖床轉(zhuǎn)速210 r/min,接種量為3%,裝液量為60/250 mL,pH 7.23。3.采用硫酸銨沉淀法對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行分級(jí)沉淀,確定析出蛋白所需(NH4)2SO4的飽和度80%,通過(guò)陰離子交換、SuperdexTM 75層析得到較純的拮抗蛋白,經(jīng)SDS-PAGE電泳分析,其分子量為20.1 kDa。該蛋白具有耐熱、耐酸堿、不受紫外照射的影響等特性,是一種穩(wěn)定性較好的拮抗蛋白。4.利用不同濃度拮抗蛋白,測(cè)定其對(duì)靶標(biāo)病原菌的菌絲生長(zhǎng)抑制作用、病原菌孢子萌發(fā)和菌絲形態(tài)的影響。結(jié)果表明拮抗蛋白對(duì)病原菌菌的菌絲生長(zhǎng)及孢子萌發(fā)均有明顯的抑制作用;菌絲形態(tài)明顯畸形,膨脹,病菌菌絲雜亂,分支脫落,菌絲出現(xiàn)斷裂現(xiàn)象。5.采用平板對(duì)峙法,檢測(cè)菌株S6對(duì)常見病原菌的抑制作用;傷口接種法,檢測(cè)菌株S6對(duì)不同植物是否侵染;采用噴霧法,用菌株S6發(fā)酵液進(jìn)行田間防治試驗(yàn)。結(jié)果顯示:菌株S6發(fā)酵液具有較廣抑菌作用,在一定劑量范圍內(nèi)對(duì)植物沒有侵染,發(fā)酵液對(duì)番茄早疫病有較好的防治效果。
【圖文】：

菌株S6的菌落形態(tài)

菌株S6的革蘭氏染色Fig.2-2TheGramstainmorphologyofstrainS6
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S476

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2523772