【摘要】：馬鈴薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是馬鈴薯Y病毒組的典型成員,主要依靠煙蚜、桃蚜及人為機(jī)械性損傷在煙草上傳播和擴(kuò)散。多年來,由該病毒引起煙草病毒病在我國煙草種植區(qū)多有發(fā)生,該病危害嚴(yán)重、防治困難,對我國煙草生產(chǎn)造成極大經(jīng)濟(jì)損失。隨著RNA沉默技術(shù)的發(fā)展,為馬鈴薯Y病毒病在煙草上的防治提供全新的途徑。本研究以馬鈴薯Y病毒脈壞死株系(PVYN)為研究對象,設(shè)計(jì)帶有酶切位點(diǎn)的特異性引物,通過PCR擴(kuò)增PVY、的CP和HC-pro2個(gè)基因片段。以PVY、的CP.HC-pro基因?yàn)槟康幕?煙草脆裂病毒(TRV)改造載體PTV00為病毒載體,通過BamHI/KphI2個(gè)限制性內(nèi)切酶構(gòu)建PTV00-CP、PTV00-HC-pro重組載體,使用電擊法將重組載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101中。通過PCR、酶切、測序等驗(yàn)證目的片段已轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101中,被試煙苗剪葉后使用農(nóng)桿菌菌液噴施,通過剪葉后造成的傷口將重組表達(dá)載體導(dǎo)入煙草中,誘導(dǎo)煙草V1GS。通過人工接種PVY病毒,調(diào)查被試煙草抗病性實(shí)驗(yàn)證明無論在實(shí)驗(yàn)條件下還是自然條件下,都能有效的降解PVY CP、HC-pro基因表達(dá),從而表現(xiàn)出抗馬鈴薯Y病毒。在自然條件下,設(shè)置8個(gè)處理、共760株G80煙草,抗性試驗(yàn)表明導(dǎo)入CP基因的煙草對PVY防治效果為83.11%,導(dǎo)入HC-pro基因的煙草對PVY防治效果為86.83%,同時(shí)導(dǎo)入CP和HC-pro基因的煙草對PVY防治效果為78.34%。
[Abstract]:Potato Y virus (potato virus Y (PVY) is a typical member of potato Y virus group, which mainly relies on tobacco aphids, peach aphids and artificial mechanical damage to spread and spread in tobacco. For many years, tobacco virus disease caused by this virus has occurred in tobacco growing areas of our country, which has serious harm and difficult prevention and control, and has caused great economic losses to tobacco production in our country. With the development of RNA silencing technology, a new way to control potato Y virus disease in tobacco is provided. In this study, potato Y virus pulse necrosis strain (PVYN) was used as the research object, and specific primers with enzyme digestion sites were designed to amplify the CP and HC-pro2 gene fragments of PVY, by PCR. Using CP.HC-pro gene of PVY, as target gene, tobacco embrittlement virus (TRV) modified vector PTV00 as virus vector, PTV00-CP,PTV00-HC-pro recombinant vector was constructed by BamHI/KphI2 restriction endonuclease, and the recombinant vector was transferred into Agrobacterium tumefaciens GV3101 by electric shock method. The target fragment was transferred into Agrobacterium tumefaciens GV3101 by PCR, enzyme digestion and sequencing. The tested tobacco seedlings were cut and sprayed with Agrobacterium tumefaciens solution. The recombinant expression vector was introduced into tobacco through the wound caused by leaf cutting, and tobacco V1GS was induced. Through artificial vaccination of PVY virus, the experimental results of tobacco disease resistance showed that the expression of PVY CP,HC-pro gene could be effectively degraded under both experimental and natural conditions, thus showing resistance to potato Y virus. Under natural conditions, 760 strains of G80 tobacco were treated with 8 treatments. The resistance test showed that the control effect of CP gene on PVY, the control effect of HC-pro gene on PVY was 86.83%, and the control effect of CP and HC-pro gene on PVY was 78.34%.
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S435.72

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本文編號(hào)：2506724