【摘要】：本論文主要分為3個(gè)部分,重點(diǎn)研究了 Nrf2-ARE信號(hào)通路在奶牛乳腺上皮細(xì)胞氧化損傷中的作用。試驗(yàn)一采用體外法,選取健康奶牛乳腺上皮細(xì)胞作為材料,采用H202誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷,研究不同濃度的H2O2對(duì)原代培養(yǎng)乳腺上皮細(xì)胞的影響,建立起乳腺上皮細(xì)胞氧化損傷模型,并篩選出H202的最佳誘導(dǎo)劑量和作用時(shí)間。試驗(yàn)二以健康奶牛乳腺上皮細(xì)胞為材料,在建立乳腺上皮細(xì)胞正常對(duì)照模型和氧化損傷模型的基礎(chǔ)上,通過轉(zhuǎn)染干涉片段Nrf2-siRNA或過表達(dá)質(zhì)粒pCMV6-XL5-Nrf2來下調(diào)或上調(diào)Nrf2的表達(dá),進(jìn)而確定Nrf2-ARE通路在保護(hù)奶牛乳腺上皮細(xì)胞抵抗氧化損傷中的作用。試驗(yàn)三以健康奶牛乳腺上皮細(xì)胞為材料,建立乳腺上皮細(xì)胞正常對(duì)照模型和氧化損傷模型,通過轉(zhuǎn)染干涉試驗(yàn),確定Nrf2-ARE通路在產(chǎn)生氧化應(yīng)激的圍產(chǎn)期奶牛乳腺上皮細(xì)胞中存在激活障礙的分子機(jī)制。本研究得出以下結(jié)果:(1)采用H202可引起奶牛乳腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷,主要表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)量減少、細(xì)胞活力喪失,其原因可能是H202引起了細(xì)胞內(nèi)ROS增多,MDA、Isoprostane、PC、8-OHdG含量上升,抗氧化酶活性降低,產(chǎn)生的過多的ROS攻擊乳腺細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)產(chǎn)生過氧化,且細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和DNA也均產(chǎn)生不同程度的氧化損傷。(2)H202誘導(dǎo)的細(xì)胞活力損傷具有時(shí)間和劑量依賴性,結(jié)合H202對(duì)乳腺上皮細(xì)胞增殖率和抗氧化指標(biāo)的影響結(jié)果,可得出當(dāng)H2O2作用時(shí)間為6h,作用濃度為600μmol/L時(shí),乳腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生了較為明顯的氧化損傷,可作為構(gòu)建乳腺上皮細(xì)胞氧化損傷模型的最佳條件。(3)根據(jù)干涉片段Nrf2-siRNA轉(zhuǎn)染效果50%,篩選出干涉片段Nrf2-siRNA3可作為干涉Nrf2的最佳轉(zhuǎn)染片段。通過上調(diào)和下調(diào)Nrf2得出Nrf2在Nrf2-ARE通路中起重要作用,Nrf2-ARE信號(hào)通路是乳腺上皮細(xì)胞抵抗氧化損傷中最為主要的防御機(jī)制之一,Nrf2-ARE通路下游的抗氧化基因HO-1是乳腺上皮細(xì)胞發(fā)揮抗氧化作用的主要基因,其主要通過Nrf2-ARE通路發(fā)揮抗氧化作用,保護(hù)乳腺上皮細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損傷。(4)氧化應(yīng)激在奶牛圍產(chǎn)期乳房炎發(fā)病中扮演著重要的角色,可通過激活Nrf2轉(zhuǎn)錄或升高HO-1表達(dá)水平等方式降低乳腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生的氧化損傷。氧化應(yīng)激條件下,Nrf2轉(zhuǎn)錄活性下降,說明Nrf2在氧化應(yīng)激條件下存在激活障礙。(5)氧化應(yīng)激條件下,乳腺上皮細(xì)胞中Nrf2存在激活障礙的主要原因是ATM蛋白激酶表達(dá)出現(xiàn)異常,減少了 Nrf2的磷酸化和入核,降低了 Nrf2與ARE的結(jié)合,進(jìn)而降低了 Nrf2-ARE通路下游抗氧化基因HO-1、NQO1、GCLC、GCLM的表達(dá),最終導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞凋亡或壞死。綜合上述研究結(jié)果得出,Nrf2-ARE信號(hào)通路是乳腺上皮細(xì)胞抵抗氧化損傷最主要的防御機(jī)制之一,可保護(hù)乳腺上皮細(xì)胞免受氧化損傷。Nrf2在氧化應(yīng)激條件下轉(zhuǎn)錄活性下降,說明Nrf2在氧化應(yīng)激條件下存在激活障礙,其原因主要是ATM蛋白激酶表達(dá)出現(xiàn)異常,減少了 Nrf2的磷酸化和入核,降低了 Nrf2與ARE的結(jié)合,進(jìn)而降低了 Nrf2-ARE通路下游抗氧化基因HO-1、NQO1、GCLC、GCLM的表達(dá),最終導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞凋亡或壞死。通過調(diào)控Nrf2-ARE信號(hào)通路可能成為保護(hù)乳腺組織免受氧化損傷的一種有效的工具。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S823

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 馬燕芬;宋利文;高民;王麗芳;;氧化應(yīng)激對(duì)圍產(chǎn)期奶牛乳房炎的影響及其調(diào)控機(jī)制[J];動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào);2015年03期

2 王振云;周璇;李惠俠;廖旭東;崔群維;李蓮;王根林;;茶多酚對(duì)氧化應(yīng)激所致奶牛乳腺上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年03期

3 唐穎,張令強(qiáng),賀福初;利用一種新的網(wǎng)上工具Scansite進(jìn)行蛋白質(zhì)磷酸化預(yù)測[J];生物工程學(xué)報(bào);2004年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 金鹿;維生素A對(duì)奶牛乳腺硒蛋白合成及抗氧化功能影響機(jī)理的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 王艷明;日糧脂肪和能量水平對(duì)奶牛氧化應(yīng)激、生產(chǎn)性能的影響及抗氧化劑添加效果研究[D];浙江大學(xué);2010年

3 熊桂林;硫辛酸對(duì)圍產(chǎn)期奶牛的抗氧化作用研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 代迎春;圍產(chǎn)期奶牛血清中抗氧化酶活性與銅鋅錳鎂含量變化規(guī)律的比較研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

，

本文編號(hào)：2456049