【摘要】：本研究針對青海省6個辣椒主產(chǎn)區(qū)(西寧市、海東市、黃南州、海西州、海北州、海南州)進(jìn)行辣椒疫霉菌的采樣調(diào)查,共分離純化出357株辣椒疫霉菌,選擇其中80株病菌作為研究對象進(jìn)行分析。實驗鑒定了青海省辣椒疫霉菌的交配型類型、測定對甲霜靈抗性及劃分優(yōu)勢小種,并利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對青海省辣椒疫霉菌遺傳多樣性進(jìn)行分析,主要結(jié)果如下:1.供試的80份疫霉菌共測定出3種交配型分別為A0,A1和A2,其中,A1交配型共33株,占被測總數(shù)的41.25%;A2交配型46株,占總數(shù)的57.5%;A0交配型1株,占總數(shù)的1.25%。沒有檢測到A1A2和A1,A2交配型菌株。2.測定供試菌株的甲霜靈抗性,其中敏感性菌株(MS)為38株,占總數(shù)的47.5%,中間菌株(MI)26株,占總數(shù)的32.5%,抗性菌株(MR)16株,占總數(shù)的20%。從產(chǎn)區(qū)分布上看,常年種植辣椒的地區(qū)如西寧市、海東市等鑒定發(fā)現(xiàn)大部分為MS和MI,辣椒種植歷史較短的地區(qū)如海西州、海北州等發(fā)現(xiàn)的菌株全部為MI和MR,沒有MS;部分地區(qū)鑒定出三種菌株都存在。3.采用離體葉片法及灌根法鑒定供試菌株生理小種類型,結(jié)果表明:(1)離體葉片法共鑒定出2種生理小種,分別為Race2、Race3,沒有檢測到Race1。其中Race2及Race3生理小種占被測總株數(shù)的32.6%和67.4%;(2)灌根法共鑒定出Race2和Race3兩種類型的生理小種,沒有檢測到Race1。其中Race2及Race3生理小種占被測總株數(shù)的37.5%和62.5%;兩種測定方法結(jié)果均表明Race3發(fā)生頻率高于Race2,則Race3為青海省辣椒疫霉菌的優(yōu)勢生理小種。4.SSR-PCR反應(yīng)體系利用正交優(yōu)化設(shè)計(L16(44))的方法對4因素(DNA、引物、d NTPs、Taq酶)在4個水平上進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明4因素最佳濃度水平分別為:DNA1.0ng,引物0.8μmol/L,d NTPs0.5μmol/L,Taq酶1.0U。其中,對擴(kuò)增反應(yīng)影響最大的是DNA,引物、Taq酶次之,對擴(kuò)增反應(yīng)影響最小的是d NTP濃度。5.從115對引物中篩選30對特異性強(qiáng)的多態(tài)性引物,利用SSR-PCR技術(shù)對84株辣椒疫霉菌進(jìn)行遺傳多樣性分析,30條SSR引物的擴(kuò)增條帶主要集中在100-2000 bp之間,條帶數(shù)量從11-19條不等。體系擴(kuò)增的總條帶數(shù)為127條,多態(tài)性條帶為114條。利用UPGMA聚類法對84份辣椒疫霉菌樣品進(jìn)行聚類分析,遺傳距離分布在0.42-0.94間,平均為0.62,當(dāng)閾值為0.71時可將84份辣椒疫霉菌分成9個大類,供試菌株表現(xiàn)出豐富的遺傳多樣性,其中,第一聚類包括了6個地區(qū)的20個菌株為優(yōu)勢種群。
[Abstract]:In this study, a total of 357 strains of Phytophthora capsici were isolated and purified from 6 main pepper producing areas (Xining, Haidong, Huangnan, Haixi, Haibei and Hainan) in Qinghai Province. 80 of them were selected for analysis. The mating type of Phytophthora capsici in Qinghai Province was identified, the resistance to Metalaxyl and the division of dominant species were determined. The genetic diversity of Phytophthora capsici in Qinghai Province was analyzed by SSR molecular marker technique. The main results were as follows: 1. Three mating types were detected in 80 strains of Phytophthora infestans. Among them, 33 were A1 mating type, accounting for 41.25A 2 mating type 46 strains, accounting for 57.5% of the total mating type. A0 mating type was 1 strain, accounting for 1. 25% of the total. No mating strain of A1A2 and A _ 1 / A _ 2 was detected. In the tested strains, 38 strains (47.5%) were sensitive to (MS), 26 strains were intermediate strains (32.5%), 16 strains (20.5%) were resistant strains. From the point of view of the distribution of producing areas, the identification of perennial chili growing areas such as Xining City, Haidong City and so on found that most of them were MS and MI, pepper growing history, such as Haixi Prefecture, Haibei Prefecture and so on. All the strains found in Haibei state were MI and MR, without MS;. Three strains were identified in some areas. The results showed that: (1) two physiological races were identified by in vitro leaf method, respectively, and Race1. was not detected by Race2,Race3,. The physiological races of Race2 and Race3 accounted for 32.6% and 67.4% of the total number of plants tested. (2) two types of physiological races of Race2 and Race3 were identified by root irrigation, and no Race1. was detected. The physiological races of Race2 and Race3 accounted for 37.5% and 62.5% of the total number of plants tested. The results of two methods showed that the frequency of Race3 was higher than that of Race2, Race3 was the dominant physiological species of Phytophthora capsici in Qinghai Province. The four factors (DNA, primer) were analyzed by orthogonal optimization design (L16 (44) in 4.SSR-PCR reaction system. D NTPs,Taq enzyme was optimized at 4 levels. The results showed that the optimal concentration level of the four factors was: DNA1.0ng, primer 0.8 渭 mol/L,d NTPs0.5 渭 mol/L,Taq 1.0 U. Among them, the DNA, primer had the greatest influence on the amplification reaction, followed by the Taq enzyme, and the d NTP concentration was the least affected on the amplification reaction. The genetic diversity of 84 strains of Phytophthora capsici was analyzed by SSR-PCR technique. The amplified bands of 30 SSR primers were mainly between 100-2000 bp. The number of bands varies from 11 to 19. The total number of bands amplified was 127 and the number of polymorphic bands was 114. The genetic distance of 84 samples of Phytophthora capsici was analyzed by UPGMA clustering method. The genetic distance was between 0.42-0.94, with an average of 0.62.When the threshold value was 0.71, 84 samples of Phytophthora capsici could be divided into 9 groups. The tested strains showed abundant genetic diversity, and the first cluster consisted of 20 strains from 6 regions as dominant populations.
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S436.418

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本文編號：2420381