【摘要】：川黃柏在我國(guó)的利用歷史悠久,是我國(guó)傳統(tǒng)的大宗木本藥材,且其內(nèi)皮富含多種生物堿成分,國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值極高。由于自然和人為等因素的影響,近幾年來(lái)川黃柏的野生資源越來(lái)越少;基于此,本實(shí)驗(yàn)試圖建立川黃柏的高效再生體系,同時(shí)探討外源激素對(duì)當(dāng)年生川黃柏幼苗生長(zhǎng)生理特性及主要藥用成分含量的影響。鐵皮石斛是我國(guó)新興的名貴森林藥材,本文同時(shí)探究了外源6-BA和GA3對(duì)鐵皮石斛幼苗NaCl脅迫生長(zhǎng)的影響。全文結(jié)果如下:1.以健康、飽滿的川黃柏種子為供試材料,得到川黃柏種子最佳消毒:75%酒精消毒45 s和0.1%升汞消毒20 min組合;種子預(yù)處理方式:經(jīng)98%H2SO4浸泡20min破殼后,4℃下1.0mol·L-1GA3浸種24h;無(wú)菌幼苗子葉和根段的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:MS+2.0mg·L-16-BA+1.5mg·L-1NAA,莖段愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基配方為:MS+2.0mg·L-16-BA+(0.5、1.0、1.5)mg·L-1NAA;不定芽分化的培養(yǎng)基配方為:MS+2.0 mg·L-1 6-BA;不定芽增殖的培養(yǎng)基配方為:MS+0.5mg·L-16-BA+0.4mg·L-12,4-D;不定芽生根的培養(yǎng)基配方為:1/2MS+2.0 mg-L-1 IBA+0.5%活性炭;生根的組培苗連續(xù)煉苗7 d后,移栽至滅菌混合基質(zhì)(珍珠巖:泥炭土 =1:4)中,連續(xù)培養(yǎng)15 d,植株成活率為80%,植株長(zhǎng)勢(shì)較好。2.本試驗(yàn)研究以川黃柏幼苗為實(shí)驗(yàn)材料,使用不同濃度的6-BA、NAA和GA3進(jìn)行葉片噴施處理。在川黃柏幼苗生長(zhǎng)的不同階段,分別測(cè)定了幼苗的生物量、葉綠素、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)及抗氧化酶活性等生理學(xué)方面的變化,同時(shí)也測(cè)定了幼苗各器官中的藥用成分含量。在我們的試驗(yàn)中,較幼苗初期相比,不同濃度的激素均能促進(jìn)幼苗葉片和株高的提高,外源激素對(duì)促進(jìn)幼苗根和莖的木質(zhì)化效果好于葉片,且一定濃度的6-BA對(duì)增強(qiáng)植物光合作用的效果優(yōu)于其余兩種激素。隨著幼苗生長(zhǎng),各處理組中可溶性糖含量保持較穩(wěn)定的狀態(tài),可溶性蛋白質(zhì)含量逐漸降低,而MDA含量在一定程度上隨幼苗生長(zhǎng)有所提高。隨幼苗生長(zhǎng)表現(xiàn)出來(lái)的還有SOD活性和Vc含量的降低,POD活性稍微增強(qiáng)后出現(xiàn)驟降;其中較對(duì)照組相比,15.0 mg·L-1 GA3明顯抑制了幼苗生長(zhǎng)中后期SOD、POD和CAT的活性。3.對(duì)照組和處理組幼苗各組織部位的藥用成分含量表現(xiàn)為:在第40 d,不同濃度6-BA處理組小檗堿含量在莖皮中的含量遠(yuǎn)高于對(duì)照組的含量,在根皮和葉片中的含量沒(méi)有顯著變化;其中較對(duì)照組相比,小檗堿最大含量出現(xiàn)在30.0 mg·L-1 6-BA處理組的第40d,為46.15mg·g~(-1),較對(duì)照組提高17.68%,含量分布為葉片莖皮根皮。在第40 d,10.0 mg·L-L-1NAA處理組黃柏堿在葉片和莖皮中的含量均顯著高于對(duì)照組和其他處理組含量,該處理組幼苗總黃柏堿含量最高,為14.20 mg·g~(-1),較對(duì)照組含量提高127.71%,含量分布為莖皮葉片根皮。在第40 d,20.0 mg·L-1 6-BA處理組中幼苗各部位的巴馬汀含量均高于對(duì)照組和其他處理組,總含量為10.60 mg·g~(-1),較對(duì)照組含量提高了 55.85%,分布水平為莖皮根皮葉片;其中巴馬汀在NAA和GA3處理組的葉片和根皮存在量極低,幼苗前期并未檢測(cè)到其存在。在當(dāng)年生幼苗中,各藥用成分的含量水平總體表現(xiàn)為,小檗堿含量最多,其次是黃柏堿,巴馬汀含量最低。4.外源激素對(duì)脅迫下鐵皮石斛生長(zhǎng)的影響表現(xiàn)為:2.0 mg·L-1 6-BA可以顯著提高NaCl脅迫下鐵皮石斛幼苗根的生長(zhǎng)率,而4.0 mg·L-1 GA3則顯著的提高其根的生長(zhǎng)率;2.0mg·L-16-BA則可以降低葉綠素b含量,而4.0mg·L-16-BA則可以提高葉綠素的含量,且不同濃度6-BA對(duì)葉綠素a和類胡蘿卜素的含量無(wú)顯著性影響;2.0 mg·L-1GA3均可以提高葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的含量,而6.0 mg·L-1 GA3則降低葉綠素b含量;4.0 mg·L-16-BA和6.0 mg·L-1 GA3均可以提高可溶性糖含量。川黃柏再生體系的建立為小檗堿、黃柏堿和巴馬汀等次生代謝產(chǎn)物的提取提供了大量?jī)?yōu)質(zhì)愈傷組織,同時(shí),川黃柏藥用成分的激素調(diào)控研究也為幼苗葉片作為藥用原料提供了科學(xué)依據(jù);噴施適當(dāng)濃度的外源植物激素也可以緩解鹽脅迫對(duì)鐵皮石斛生長(zhǎng)的抑制,促進(jìn)鐵皮石斛中可溶性多糖的合成與積累。
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【學(xué)位授予單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S567.19
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本文編號(hào)：2382470