【摘要】：亞麻酸(18:3n-3,LNA)對(duì)甲殼動(dòng)物生長(zhǎng)、免疫、抗氨氮脅迫和脂質(zhì)代謝具有重要的調(diào)節(jié)作用,本研究采用營(yíng)養(yǎng)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)與方法,系統(tǒng)地研究了亞麻酸(18:3n-3,LNA)對(duì)日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)的營(yíng)養(yǎng)生理作用。分析了飼料LNA水平對(duì)日本沼蝦幼蝦生長(zhǎng)性能、抗氧化、非特異性免疫性能和抗氨氮脅迫的影響;探討了飼料LNA水平機(jī)體脂肪酸組成及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的影響;克隆了Δ6脂肪酸去飽和酶(Δ6 FAD)基因,分析了該基因的分子結(jié)構(gòu),探討了飼料LNA水平對(duì)其表達(dá)的影響。具體研究結(jié)果如下:配制LNA含量分別為0%(L0,對(duì)照組)、0.5%(L0.5)、1.0%(L1.0)、1.5%(L1.5)、2.0%(L2.0)和2.5%(L2.5)的6組等氮等脂的半純化飼料,飼養(yǎng)日本沼蝦幼蝦(始均重為0.12±0.01 g)8周,之后進(jìn)行24 h氨氮(氯化銨濃度為36.60mg/L)脅迫,分析對(duì)日本沼蝦幼蝦生長(zhǎng)、存活、抗氧化能力、非特異性免疫性能和氨氮脅迫下生理指標(biāo)的影響,探討日本沼蝦幼蝦飼料中適宜LNA添加量。結(jié)果表明:日本沼蝦特定生長(zhǎng)率、增重率和存活率均隨飼料LNA水平的升高呈先升后降的趨勢(shì);隨著飼料中LNA添加量的增加,日本沼蝦肝胰腺SOD、GSH-Px活性和T-AOC基本呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì),且都在L1.0組達(dá)到最高,顯著高于其余各組(P0.05);L0組肝胰腺中MDA含量顯著高于其余各組(P0.05);飼料LNA水平的增加顯著提高了ACP和LYZ的活性,分別在L1.0組和L1.5組達(dá)到最高值;氨氮脅迫后,L0組的MDA顯著高于LNA添加組,在LNA添加量達(dá)1.5%時(shí),MDA含量顯著低于其余各組(P0.05),同時(shí)肝胰腺T-SOD、GSH-Px和T-AOC活性均隨飼料LNA含量升高呈先上升后下降趨勢(shì),其中T-SOD活性在L1.5組達(dá)到最高,而T-AOC和GSH-Px在L1.0組活性達(dá)到最高。以SOD活性為指標(biāo),經(jīng)二次回歸方程分析表明,日本沼蝦有效LNA需要量為1.19%。綜上,飼料LNA添加量在1.0%~1.5%之間時(shí),能顯著提高日本沼蝦幼蝦抗氧化性能和免疫力,緩解氨氮脅迫對(duì)其造成的負(fù)面影響。亞麻酸是合成機(jī)體HUFA的前體,通過添加LNA來調(diào)控機(jī)體HUFA含量對(duì)降低飼料成本具有重要意義。飼喂日本沼蝦LNA含量分別為0%(L0,對(duì)照組)、0.5%(L0.5)、1.0%(L1.0)、1.5%(L1.5)、2.0%(L2.0)和2.5%(L2.5)的6組等氮等脂的半純化飼料,分析其機(jī)體脂肪酸組成及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)量。結(jié)果表明:日本沼蝦肝胰腺脂肪含量隨著飼料LNA含量的增加降低,L2.5組脂肪含量顯著低于其余各組。肌肉及肝胰腺LNA含量隨著飼料LNA含量的增加而增加,肌肉及肝胰腺20:5n-3、22:5n-3和22:6n-3含量高于其在飼料中的含量,但肌肉及肝胰腺組織20:5n-3、22:5n-3和22:6n-3含量并不隨機(jī)體的LNA增加而增加。乙酰輔酶A(ACC)、△9去飽和酶(SCD)和脂肪酸延長(zhǎng)酶6(elovl6)mRNA表達(dá)量均隨飼料中LNA含量的升高呈現(xiàn)降低趨勢(shì),均在L2.5組達(dá)到最低值。而肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1(CPT1)mRNA表達(dá)量均隨飼料中LNA含量的升高呈現(xiàn)升高趨勢(shì),在L2.0組和L2.5組達(dá)到最高值。本研究表明,飼料LNA水平可以通過影響脂肪酸合成途徑及β氧化途徑降低機(jī)體脂肪含量,并通過影響脂肪酸去飽和酶和延長(zhǎng)酶mRNA表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)體脂肪酸組成。Δ6 FAD是HUFA合成過程中的限速酶。采用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆得到日本沼蝦Δ6 FAD cDNA全長(zhǎng)序列,并利用熒光定量PCR技術(shù)分析其在肝胰腺、心臟、肌肉、腸道、胃、鰓、血液、卵巢、卵子等9種組織的表達(dá),同時(shí)分析飼料LNA水平對(duì)Δ6 FAD基因表達(dá)的影響,結(jié)果表明:Δ6 FAD全長(zhǎng)序列為1906 bp,其中5'非編碼區(qū)(UTR)含122 bp,3'非編碼區(qū)(UTR)含394 bp,開放閱讀框(ORF)包含1362 bp,總共編碼453個(gè)氨基酸,并且編碼的蛋白序列具有典型的去飽和酶特性:1個(gè)HPGG結(jié)構(gòu)域、3個(gè)組氨酸保守區(qū)和1個(gè)N端細(xì)胞色素b5結(jié)構(gòu)域。組織表達(dá)結(jié)果顯示,Δ6 FAD基因在日本沼蝦各個(gè)組織中均有表達(dá),高表達(dá)于肌肉組織,且其表達(dá)水平顯著高于其他組織(P0.05),其次是卵子和鰓組織,在肝胰腺組織中表達(dá)量最低。飼料LNA水平上調(diào)Δ6 FAD基因的表達(dá)量。飼料中LNA水平顯著上調(diào)肝胰腺Δ6 FAD基因的表達(dá)量,在L2.5組達(dá)到最大值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S968.22

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2365681