【摘要】：異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)具有生長快、個體大、抗逆性強等特點,在養(yǎng)殖生產(chǎn)中顯示出良好的經(jīng)濟性狀。隨著養(yǎng)殖集約化的發(fā)展,導致水環(huán)境惡化,同時,養(yǎng)殖戶對疾病防控的意識薄弱,導致水產(chǎn)病害頻發(fā)。2015年,上海濱�；氐漠愑y鯽發(fā)生了出血性敗血病,為探究病原,對疫區(qū)進行疾病調(diào)查,通過病原菌的篩查、分離、鑒定、回感試驗,確定發(fā)病原因;對病原菌的16S rRNA基因、管家基因(gyrB和rpoB)的測序,建立致病菌系統(tǒng)進化樹,結(jié)合ATB和Biolog細菌鑒定系統(tǒng)對致病菌進行生理生化鑒定,綜合判定致病菌的種類及其分類地位;腹腔注射法人工感染異育銀鯽,對發(fā)病魚的肝胰腺、腎臟、脾臟、鰓和腸道進行組織病理觀察,明確致病菌的主要侵染器官;測定致病菌的脲酶、明膠酶、脂酶、淀粉酶和溶血性等與致病相關(guān)指標,根據(jù)已報道的7個毒力基因序列,設計引物進行PCR擴增,研究病原菌毒力基因攜帶情況;最后對致病菌進行藥物敏感性實驗和免疫防治,為生產(chǎn)實踐提供參考。通過走訪調(diào)查顯示:異育銀鯽的出血性敗血癥發(fā)生在2015年6-9月,發(fā)病時養(yǎng)殖水體的溫度為25-27℃,現(xiàn)場死亡率為20%-30%。初期癥狀為攝食量減少,伏于池底不動;隨后病情加重,表現(xiàn)為全身性充血、出血,腹部腫脹,腹部鱗片基部嚴重出血,鰭條充血以至出血,肛門紅腫出血并伴有膿樣液體流出。腹腔中有黃色渾濁腹水,肝胰腺充血,肌肉充血出血,呈現(xiàn)典型的細菌性敗血癥癥狀。從瀕死異育銀鯽內(nèi)臟分離到一株致病菌GY 15,腹腔注射感染和浸泡感染都能導致異育銀鯽的發(fā)病和死亡,其中,腹腔注射感染的半數(shù)致死量(LD50)為4.26×105 CFU/mL,且人工感染的發(fā)病癥狀與塘口病魚相似。通過生理生化和分子生物學方法對GY 15菌株進行鑒定。API-32E鑒定結(jié)果為遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda),鑒定率值為99.9%,鑒定評語為極好的鑒定;Biolog的鑒定結(jié)果與E.tarda的位距為6.381,相似性為0.569,獲得了比較好的鑒定結(jié)果,分子生物學(16S rRNA基因和多位序列分型)的鑒定結(jié)果與E.tarda聚為一支。綜合以上結(jié)果,確定GY 15菌株為E.tarda。GY 15菌株是導致異育銀鯽出血性敗血癥的新病原,并對異育銀鯽的養(yǎng)殖造成威脅。人工感染的異育銀鯽在肝胰腺、腎臟和脾臟表現(xiàn)的病理變化最為嚴重。肝胰腺主要表現(xiàn)為細胞腫脹、空泡變性和細胞壞死;腎臟主要表現(xiàn)為腎實質(zhì)細胞壞死、炎性細胞浸潤;脾臟主要表現(xiàn)為大量鐵血黃素色素沉著、細胞壞死和炎性細胞浸潤;鰓組織主要表現(xiàn)為鰓小片的上皮細胞、柱細胞腫脹和外出血癥狀;腸道病理損傷最小。GY 15菌株對脲酶、明膠酶、脂酶、淀粉酶和溶血性均無活性;而7個毒力基因在GY 15菌株中均能檢測到,分別為sodB(490 bp)、katB(377 bp)、esrB(454bp)、gadB(308 bp)、fimA(839 bp)、citC(553 bp)和mukF(303 bp)。GY 15是一株強毒株,綜合國內(nèi)分離的E.tarda的毒力基因攜帶情況,認為用fimA和(或)gadB基因可以對致病性E.tarda進行快速鑒定。用免疫防治和藥敏試驗來探討對遲緩愛德華氏菌病的防治方法,注射滅活疫苗和滅活佐劑疫苗能提高血清中超氧歧化酶活性(SOD)和溶菌酶活性(LZM),滅活疫苗和滅活佐劑疫苗對異育銀鯽的免疫保護率分別為26.18%和30.42%,未達到很好的免疫保護效果;藥敏試驗結(jié)果顯示,該菌對恩諾沙星、氟苯尼考和氧氟沙星等26種藥物敏感,對新霉素、四環(huán)素和復方新諾明等18種藥物表現(xiàn)為耐藥。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中,建議用恩諾沙星、氟苯尼考和諾氟沙星進行抗生素治療。
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【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S943

【參考文獻】

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