【摘要】：本文主要目的是為了分析藥用植物邳半夏內(nèi)生細(xì)菌的多樣性以及評(píng)估其潛在促生長(zhǎng)活性,并探究潛在促生長(zhǎng)細(xì)菌對(duì)邳半夏無(wú)菌苗生長(zhǎng)和次生代謝產(chǎn)物積累的影響。我們以江蘇徐州的邳半夏為實(shí)驗(yàn)材料,采用純培養(yǎng)與免培養(yǎng)相結(jié)合的方法深入了解邳半夏中內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)。根據(jù)形態(tài)特征的不同,我們挑選具有代表性的可培養(yǎng)內(nèi)生菌株測(cè)序并進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。根據(jù)邳半夏內(nèi)生細(xì)菌潛在促生指標(biāo)結(jié)合小麥促生長(zhǎng)等方法獲得促生長(zhǎng)菌株,并通過邳半夏生物量及次生代謝產(chǎn)物的變化探索菌株KLBMPPT001和KLBMPPT024以及二者的混合物對(duì)宿主植物邳半夏的促生效果。從邳半夏根莖葉中共分離到53株內(nèi)生細(xì)菌,對(duì)部分可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌的16S rDNA序列分析發(fā)現(xiàn),35株邳半夏內(nèi)生細(xì)菌歸屬于厚壁菌門(Firmicutes)和變形菌門(Proteobacteria);共7個(gè)屬。高通量數(shù)據(jù)分析表明,邳半夏樣品中內(nèi)生細(xì)菌主要分布于6個(gè)門(Actinobacteria、Proteobacteria、Tenericutes、Firmicutes、Bacteroidetes、Cyanobacteria);高通量測(cè)序得知到邳半夏中存在許多微生物在純培養(yǎng)中未檢測(cè)到。分類分析發(fā)現(xiàn),邳半夏中主要以Flavobacterium等二十九個(gè)菌屬占優(yōu)勢(shì)。邳半夏內(nèi)生細(xì)菌潛在促生活性篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,邳半夏中存在不少潛在促生菌株。在檢測(cè)的23株邳半夏內(nèi)生細(xì)菌中,78%的菌株具備潛在固氮能力,48%的菌株能夠溶解無(wú)機(jī)磷,30%的菌株可以溶解有機(jī)磷,96%的菌株能夠產(chǎn)鐵載體,57%的菌株具有產(chǎn)ACC脫氨酶潛能,65%的菌株可以產(chǎn)IAA,87%的菌株能夠分泌纖維素酶,74%的菌株能夠分泌木聚糖酶,70%的菌株可以分泌蛋白酶,22%的菌株產(chǎn)生淀粉酶。小麥平板實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在邳半夏內(nèi)生細(xì)菌中,部分菌株能夠在一定程度上促進(jìn)小麥的生長(zhǎng),還有部分菌株抑制小麥的生長(zhǎng)。其中,菌株KLBMPPT001、KLBMPPT011、KLBMPPT012、KLBMPPT024促生長(zhǎng)效果最為明顯。這四株細(xì)菌接種小麥盆栽結(jié)果顯示,在整個(gè)培養(yǎng)過程中,這四株菌在不同程度上影響了小麥的生長(zhǎng)。尤其是第20天的數(shù)據(jù)表明,菌株KLBMPPT001增加了小麥芽長(zhǎng)14%,增加了根長(zhǎng)48%,接種菌株KLBMPPT024的小麥芽長(zhǎng)達(dá)到了最大值(25.34±1.82)cm。此外,菌株KLBMPPT001和KLBMPPT024可以從接種的小麥中通過再分離得到。邳半夏內(nèi)生細(xì)菌回接宿主無(wú)菌苗實(shí)驗(yàn)表明,菌株KLBMPPT001和KLBMPPT024能夠促進(jìn)宿主植物邳半夏的生長(zhǎng)并影響邳半夏次生代謝產(chǎn)物的積累。尤其是接種后的第十天,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組(KLBMPPT001、KLBMPPT024、Co-colture)很大程度上影響了邳半夏無(wú)菌苗的生長(zhǎng)以及總生物堿和鳥苷的積累,實(shí)驗(yàn)組邳半夏根長(zhǎng)增加了90%-307%、芽長(zhǎng)增加了55%-194%、根數(shù)增加了83%-200%、葉片面積增加了121%-232%、無(wú)菌苗鮮重增加了6%-231%、干重增加了17%-165%、總生物堿含量增加了50%-140%、鳥苷含量增加了17%-219%。本研究較為充分的展示了邳半夏中內(nèi)生細(xì)菌的多樣性及其潛在促生長(zhǎng)活性,探討了促生細(xì)菌對(duì)宿主植物邳半夏無(wú)菌苗的生長(zhǎng)和次生代謝產(chǎn)物積累的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為解決藥用植物半夏資源短缺以及活性成分積累問題奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：江蘇師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S567.239

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本文編號(hào)：2296701