【摘要】：羽衣甘藍(lán)(Brassica oleraceavar.acephala)含有豐富的維生素、礦物元素及一些生物活性成份,耐寒性極強(qiáng),因而在嚴(yán)寒的冬季既可以作為蔬菜,又可以組裝色彩艷麗的冬季花壇。羽衣甘藍(lán)的繁殖方式主要為種子繁殖,是有雜種優(yōu)勢較為顯著的作物之一,所以得到純系更加重要。游離小孢子技術(shù)是獲得純系自交系的快速途徑之一,因此,提高游離小孢子出胚率與提高胚狀體直接再生率,能縮短羽衣甘藍(lán)純合自交系的獲得時間,提高育種效率。無性系能夠保持品種的優(yōu)良性狀,羽衣甘藍(lán)離體再生體系的構(gòu)建是擴(kuò)大繁殖游離小孢子單株的有效方法,本研究以將游離小孢子培養(yǎng)后得到的純合優(yōu)良育種品系為試材,建立高效穩(wěn)定的再生體系,獲得大量的純合無性系。本試驗(yàn)試材以19個羽衣甘藍(lán)為材料,分析了在游離小孢子培養(yǎng)中影響胚胎發(fā)生5個因素,分別為:基因型、發(fā)育時期、蔗糖濃度、低溫預(yù)處理、高溫?zé)峒�。探討了胚狀體直接再生成苗的影響,如何獲得健壯植株,以及探究對芽誘導(dǎo)的因素,并建立了高效的羽衣甘藍(lán)小孢子植株再生體系。獲得的主要研究結(jié)果有:1.在羽衣甘藍(lán)小孢子誘導(dǎo)的過程中,19份材料中有12份材料能夠獲得胚狀體。其中產(chǎn)胚率最高為‘紅孔雀',最低為‘6BZ',其中‘42紅'、‘42白'、‘食用'、‘DHZ,、‘DFZ'、‘黑皺-粉'、‘D10×6BZ' 7種基因型經(jīng)多次反復(fù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)均未獲得胚狀體。因此本研究認(rèn)為基因型是影響羽衣甘藍(lán)小孢子胚胎發(fā)生的主要因素。2.花蕾大小可以反映小孢子發(fā)育進(jìn)程,但不同基因型材料,小孢子發(fā)育時期存在很大的差異。當(dāng)羽衣甘藍(lán)花蕾長度在2.51～4.00mm時游離小孢子一般處在單核早期到單核晚、雙核早期階段,此時的游離小孢子具有較高的胚誘導(dǎo)率。3.不同基因型的羽衣甘藍(lán)游離小孢子對低溫處理的時間有不同的要求,總體上,各基因型在小孢子培養(yǎng)前將花蕾放置4℃低溫預(yù)處理24～48h對胚產(chǎn)量均有提高,時間過長會抑制小孢子的誘導(dǎo)率。高溫?zé)峒ぴ?3℃下熱激24～48h對羽衣甘藍(lán)小孢子胚狀體的產(chǎn)胚率有一定促進(jìn)作用。不同基因型對適宜的蔗糖濃度的需求量不同,總體上講,適宜小孢子培養(yǎng)的蔗糖濃度為130g·L~（-1）和160g·L~(-1）。4.對子葉型胚狀體誘導(dǎo)前,在4℃低溫下預(yù)處理4天后轉(zhuǎn)接到固體培養(yǎng)基,更有利于羽衣甘藍(lán)胚狀體直接再生植株。與其他發(fā)育時期的胚狀體相比,子葉型胚狀體誘導(dǎo)成功率較高,MS為最適宜子葉胚狀體直接再生成苗的基本培養(yǎng)基,此時更有容易直接再生成苗。最適宜羽衣甘藍(lán)胚狀體再生的激素濃度配比為0.2mg L~（-1）6-BA+O.1 mg·L~（-1）NAA。在1/2MS培養(yǎng)基中添加適宜濃度的NAA對小孢子植株的長勢,及其生根都有顯著的促進(jìn)作用。NAA濃度為0.05mg·L~（-1）和O.1mg·L~（-1）時有利于快速、高效的培養(yǎng)出健壯的小孢子植株。5.在對芽誘導(dǎo)再生的過程中,腋芽是理想的再生外植體材料,在培養(yǎng)基中添加NAA的基礎(chǔ)上加入一定濃度的6-BA有助再生芽的健壯生長,激素配比為MS+1.Omg·L~（-1）6-BA+0.05mg·L~(-1) NAA時最適宜誘導(dǎo)腋芽再生。6.在培養(yǎng)基內(nèi)添加適宜濃度的6-BA有助于再生芽的繼代培養(yǎng),當(dāng)6-BA濃度為2.0mg·L~(-1)時繼代增殖效果達(dá)到最佳。當(dāng)NAA濃度為0.2mg·L~（-1）時,芽生長勢最好,葉色油綠,葉片面積最大,莖粗壯,生長旺盛,為最佳壯苗培養(yǎng)基。7.根系長度為0.5～1.5cm最適合再生植株的生根移栽,后期小苗死亡率較低,植株生長狀態(tài)最好。
[Abstract]:Brassica oleracea var. acephala is rich in vitamins, mineral elements and some biological active ingredients. It has strong cold resistance. Therefore, it can be used as a vegetable in cold winter and can assemble colorful winter flower beds. Free microspore technology is one of the fast ways to obtain pure inbred lines. Therefore, increasing the rate of free microspore embryogenesis and the rate of direct embryoid regeneration can shorten the time of obtaining homozygous inbred lines and improve the breeding efficiency. The construction of in vitro regeneration system of cabbage is an effective method for expanding the propagation of isolated microspore single plant. In this study, a high efficient and stable regeneration system was established and a large number of homozygous clones were obtained by using the excellent homozygous breeding strains obtained after free microspore culture. Five factors affecting embryogenesis in spore culture were genotype, developmental stage, sucrose concentration, low temperature pretreatment and high temperature heat shock. The effects of direct embryoid regeneration on seedling formation, how to obtain robust plants, and the factors affecting bud induction were discussed. The main results are as follows: 1. In the process of microspore induction, 12 of 19 materials were able to obtain embryoids. Among them, the highest embryogenic rate was'Red Peacock', and the lowest was'6BZ', among which'42 Red','42 White','edible','DHZ,'DFZ','black wrinkle-powder', and'D10 x 6BZ'seven genotypes were not obtained after repeated culture experiments. 2. Bud size can reflect the microspore development process, but the microspore development stages of different genotype materials are very different. When the bud length of kale is 2.51-4.00 mm, the free microspore is generally in the early stage of monocyte. The free microspore of different genotypes of Brassica oleracea had different requirements on the time of low temperature treatment. Generally speaking, the embryo yield of each genotype was increased when the bud was pretreated at low temperature for 24-48 hours before microspore culture. Heat shock at 33 C for 24 to 48 h promoted the embryogenesis of microspore embryoids in Brassica oleracea L. Different genotypes had different requirements for suitable sucrose concentration. Generally speaking, the sucrose concentration suitable for microspore culture was 130 g L ~(- 1) and 160 G (- 1). 4. Before induction, the cotyledon embryoids could be induced more successfully than other embryoids. MS was the most suitable medium for cotyledon embryoids to regenerate seedlings directly, and it was easier to regenerate seedlings directly. The best ratio of hormone concentration for embryoid regeneration of Brassica oleracea L. ~(-1) 6-BA + O.1 mg (-1) NAA was 0.2 mg L (-1) NAA. Adding appropriate concentration of NAA to 1/2 MS medium could significantly promote the growth and rooting of microspore plants. In the process of bud induction and regeneration, axillary bud is an ideal regeneration explant material. Adding a certain concentration of 6-BA on the basis of adding NAA in the medium can promote the healthy growth of regeneration bud. The optimum ratio of hormone is MS + 1.Omg (-1) 6-BA + 0.05mg (-1) NAA. 6. Adding suitable concentration of NAA in the medium is the best way to induce axillary bud regeneration. When the concentration of NAA was 0.2 mg (-1), the bud growth vigor was the best, the leaf color was oily green, the leaf area was the largest, the stem was strong, and the growth was vigorous. 7. Root length was 0.5-1.5 cm, which was the best medium for the regeneration of strong seedlings. In the later stage, the seedling mortality rate was low, and the plant growth condition was the best.
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S681.9

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