本文關(guān)鍵詞：鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院》 2015年

鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究

王文杰  

【摘要】：動(dòng)物遺傳資源的多樣性對(duì)于人類生存和經(jīng)濟(jì)發(fā)展至關(guān)重要。因此,對(duì)動(dòng)物遺傳資源的保存也變得尤為重要。由于干細(xì)胞具有“無(wú)限”增殖和自我更新的特點(diǎn),以干細(xì)胞的形式來(lái)保存動(dòng)物的遺傳資源已得到廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)建立了適于鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)體系,通過(guò)對(duì)其生物學(xué)特性的研究,以及細(xì)胞治療小鼠肝損傷的研究,為動(dòng)物遺傳資源的保存利用提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù),并為利用干細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞治療奠定了基礎(chǔ)。得到以下結(jié)果:1.采用膠原酶Ⅳ消化法分離鴨胚臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,在體外可傳代培養(yǎng)到39代。細(xì)胞形態(tài)以長(zhǎng)梭形為主;對(duì)純化細(xì)胞進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子標(biāo)志鑒定,免疫熒光檢測(cè)顯示CD29和CD44表達(dá)陽(yáng)性,RT-PCR結(jié)果顯示不同代次細(xì)胞的CD44,CD71,CD73均表達(dá)陽(yáng)性。以上結(jié)果證明,所分離的細(xì)胞為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。利用成骨誘導(dǎo)液對(duì)肝間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色呈陽(yáng)性,RT-PCR檢測(cè)到成骨細(xì)胞特異性分子標(biāo)記Collagen typeⅠ和Osteopontin;利用脂肪誘導(dǎo)液對(duì)肝間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行油紅O染色可見(jiàn)到紅色脂滴,RT-PCR檢測(cè)到脂肪細(xì)胞特異性分子標(biāo)記LPL和PPAR-γ,結(jié)果表明,臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有多潛能性。2.采用膠原酶Ⅳ消化法分離鴨胚肝臟間充質(zhì)干細(xì)胞,在體外可傳代培養(yǎng)到56代。細(xì)胞形態(tài)以長(zhǎng)梭形和不規(guī)則形為主,混有少量圓形細(xì)胞,細(xì)胞核較小;生長(zhǎng)曲線顯示細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖能力;對(duì)純化細(xì)胞進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子標(biāo)志鑒定,免疫熒光檢測(cè)顯示CD44,CD105,CD166,IL-7表達(dá)陽(yáng)性,RT-PCR結(jié)果顯示不同代次細(xì)胞的CD71,CD73,SOX2,KLF4均表達(dá)陽(yáng)性。以上結(jié)果證明,所分離的細(xì)胞為肝間充質(zhì)干細(xì)胞。利用成骨誘導(dǎo)液對(duì)肝臟間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色呈陽(yáng)性,RT-PCR檢測(cè)到成骨細(xì)胞特異性分子標(biāo)記Collagen typeⅠ和Osteopontin;利用脂肪誘導(dǎo)液對(duì)肝間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行油紅O染色可見(jiàn)到紅色脂滴,RT-PCR檢測(cè)到脂肪細(xì)胞特異性分子標(biāo)記LPL和PPAR-γ;利用肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)液對(duì)肝間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行糖原染色呈陽(yáng)性,RT-PCR檢測(cè)到肝細(xì)胞表面標(biāo)志物AFP和ALB。結(jié)果表明,肝臟間充質(zhì)干細(xì)胞具有多潛能性,可向不同胚層細(xì)胞進(jìn)行分化。3.采用CCl4灌胃法制作肝損傷小鼠模型,HE染色和MT染色顯示肝組織正常結(jié)構(gòu)被破壞,肝纖維組織增生,血清學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AST和ALT值均明顯超出正常范圍。對(duì)誘導(dǎo)后的肝樣細(xì)胞進(jìn)行CM-Dil標(biāo)記,將標(biāo)記后的細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射到肝損傷小鼠體內(nèi),組織學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)均顯示肝損傷有所恢復(fù)。結(jié)果表明,誘導(dǎo)后的肝樣細(xì)胞對(duì)小鼠肝損傷具有一定的治療作用。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)在體外成功分離培養(yǎng)了鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究,將誘導(dǎo)后的肝樣細(xì)胞注射到肝損傷小鼠體內(nèi),小鼠的肝損傷得到一定程度的恢復(fù)。以上結(jié)果驗(yàn)證了干細(xì)胞的自我更新能力和多潛能性,對(duì)動(dòng)物遺傳資源的保存具有重要意義,并初步地為干細(xì)胞在臨床上的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S813;Q813
【目錄】：

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4 張彥;李尚珠;;間充質(zhì)干細(xì)胞在血管工程中的機(jī)制及應(yīng)用[A];2009全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合周圍血管疾病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2009年

5 石玉;戴尅戎;;周期性拉應(yīng)力對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化影響的研究[A];第九屆全國(guó)生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

6 黎嬌;朱爭(zhēng)艷;杜智;駱瑩;王鵬;高英堂;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌物對(duì)肝細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第30次學(xué)術(shù)年會(huì)暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 譚遠(yuǎn)超;Kevin;姜紅江;黃相杰;周紀(jì)平;;間充質(zhì)干細(xì)胞在骨傷疾病治療中的應(yīng)用[A];首屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨科微創(chuàng)學(xué)術(shù)交流會(huì)暨專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2011年

8 唐佩弦;;間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用前景[A];第三屆全國(guó)血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2003年

9 戴育成;;間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性和應(yīng)用[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

10 胡琳莉;王昕榮;錢坤;李舟;楊薇;朱桂金;;小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜分化的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)、中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)生殖生物學(xué)分會(huì)聯(lián)合年會(huì)論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 滿學(xué)杰;[N];新華每日電訊;2008年

2 滿學(xué)杰;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

3 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;[N];健康報(bào);2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所 曹楷;[N];上�？萍紙�(bào);2014年

5 記者　陳建強(qiáng);[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

6 記者　馮國(guó)梧;[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

7 實(shí)習(xí)生 劉霞;[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

8 本報(bào)記者 王新佳;[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2005年

9 馮國(guó)梧;[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

10 劉瑩清;[N];北方經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄭楚萍;功能化納米粒子對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的影響及細(xì)胞成像的應(yīng)用[D];暨南大學(xué);2015年

2 王皓;五指山小型豬OCT-4、SOX-2基因在骨髓間充質(zhì)與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

3 孔德曉;間充質(zhì)干細(xì)胞及胰島素分泌細(xì)胞治療糖尿病的臨床及應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];山東大學(xué);2015年

4 董苑;SDF-1復(fù)合PDPBB的構(gòu)建及對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞趨化影響的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王磊;誘導(dǎo)胎盤來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

6 房賀;連接黏附分子A在促進(jìn)MSC修復(fù)CC14肝損傷中的作用及其機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 李雪;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

8 陳可;人臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

9 王靜;胎兒來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性以及間充質(zhì)干細(xì)胞在肝纖維化中治療機(jī)制的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

10 鞠洪斌;大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化比較的體外研究[D];中南大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李超;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中AC基因亞型的表達(dá)及AC3對(duì)其纖毛長(zhǎng)度的影響[D];河北大學(xué);2015年

2 林濤;殼聚糖水凝膠復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 彭龍英;心肌營(yíng)養(yǎng)素1促進(jìn)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化存活及PI3K/Akt信號(hào)通路機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 喬曉慧;酸性環(huán)境對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 張紅霞;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定及其對(duì)人肺癌細(xì)胞惡性表型的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

6 顧立超;BTK抑制劑對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞miR-21的調(diào)節(jié)作用[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

7 王文杰;鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

8 張猛;血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的影響[D];石河子大學(xué);2015年

9 馬麗媛;利用MyoD基因誘導(dǎo)綿羊臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 宋維文;MicroRNA-133誘導(dǎo)綿羊間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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