本文關(guān)鍵詞：鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2016年

人牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞治療慢性移植物抗宿主病的實(shí)驗(yàn)研究

張楷  

【摘要】：目的:本課題通過從人牙齦組織提取牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞(GMSCs),鑒定其表型并比較其與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ASCs)在體內(nèi)與體外免疫調(diào)節(jié)功能的差異;分析其在體外對(duì)B淋巴細(xì)胞增殖與分化的調(diào)節(jié)功能,并探討其相關(guān)的分子機(jī)制;同時(shí)建立慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并向其體內(nèi)輸注GMSCs,觀察GMSCs在體內(nèi)對(duì)慢性移植物抗宿主病的治療作用,從而為間充質(zhì)干細(xì)胞治療相關(guān)免疫疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:分別從人體組織分離出GMSCs,BMSCs與ASCs,在體外培養(yǎng)擴(kuò)增并鑒定其表型。將三種間充質(zhì)干細(xì)胞分別與T細(xì)胞共培養(yǎng),加入CD3/CD28磁珠,檢測(cè)其在體外抑制T細(xì)胞擴(kuò)增的功能;NOD小鼠輸注人外周血單核細(xì)胞建立異種GVHD模型,分別從尾靜脈輸注以上三種間充質(zhì)干細(xì)胞,比較其體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能。為了研究GMSCs對(duì)B細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用,分選人B細(xì)胞,在CD40L與IL-4的作用下,與GMSCs共同培養(yǎng),以纖維組織母細(xì)胞(Fibroblast)為對(duì)照,流式細(xì)胞儀檢測(cè)B細(xì)胞擴(kuò)增情況,細(xì)胞因子流式分析和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)相關(guān)因子和免疫球蛋白的表達(dá)水平以及B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞或調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的情況。由于B細(xì)胞能夠作為抗原提呈細(xì)胞激活T細(xì)胞的增生,將處理后的B細(xì)胞與T細(xì)胞在抗CD3抗體的作用下共培養(yǎng),檢測(cè)B細(xì)胞介導(dǎo)的T細(xì)胞活化與增殖的情況,最后在B細(xì)胞與牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞的共培養(yǎng)體系中,加入多種免疫相關(guān)信號(hào)蛋白的中和抗體,探討相關(guān)分子機(jī)制。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,建立人源化的小鼠慢性移植物抗宿主病模型,從尾靜脈輸注GMSCs,分析相關(guān)免疫性疾病的發(fā)展情況與嚴(yán)重度變化。結(jié)果:我們成功在體外提取并培養(yǎng)出具有功能且表型正常的GMSCs,它較BMSCs與ASCs有更強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能和體外擴(kuò)增能力。GMSCs能夠在體外抑制B細(xì)胞的增殖,而這種效應(yīng)不需要依賴細(xì)胞接觸就能夠?qū)崿F(xiàn);GMSCs能夠降低漿細(xì)胞的生成,促進(jìn)B細(xì)胞向調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的分化;GMSCs還能夠降低B細(xì)胞表達(dá)免疫球蛋白水平,增加其抗炎癥因子的分泌。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)TGF-β受體抗體ALK5能夠有效拮抗GMSCs的免疫調(diào)節(jié)功能。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,建立了人源化小鼠模型,從尾靜脈輸注GMSCs能夠有效治療B細(xì)胞介導(dǎo)的慢性移植物抗宿主病。結(jié)論:本研究在體外培養(yǎng)出GMSCs,證實(shí)了其在調(diào)節(jié)B細(xì)胞增殖、分化與功能等方面的作用;同時(shí)在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,GMSCs能夠有效治療慢性移植物抗宿主病損傷。機(jī)制研究表明其免疫調(diào)節(jié)功能與TGF-β信號(hào)有關(guān)。本研究將為間充質(zhì)干細(xì)胞治療相關(guān)免疫性疾病提供新的細(xì)胞來源和思路。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R617
【目錄】：

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