本文選題：J亞群禽白血病病毒 + 馬立克氏病病毒　； 參考：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：近年來,J亞群禽白血病病毒(ALV-J)和馬立克氏病病毒(MDV)共感染和協(xié)同致病的現(xiàn)象廣泛發(fā)生,給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴(yán)重的損失,然而,關(guān)于ALV-J和MDV協(xié)同感染機(jī)制尚不明了。本研究在證明ALV-J和MDV具有共同感染同一細(xì)胞能力的基礎(chǔ)上,擬通過對共感染ALV-J和MDV在細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)水平、細(xì)胞因子及病理組織學(xué)等與單獨(dú)感染的差異性分析,證明ALV-J與MDV具有協(xié)同促進(jìn)相互復(fù)制,協(xié)同增強(qiáng)感染和致病能力,為揭示ALV-J和MDV協(xié)同感染機(jī)制,研究聯(lián)合防控及其它病毒間協(xié)同感染機(jī)制奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。以10日齡無特定病原(SPF)雞胚制備雞胚成纖維細(xì)胞(CEF),接種ALV-J-NX0101病毒和MDV-MD5株病毒,設(shè)置4個實(shí)驗(yàn)組:ALV-J+MDV感染組,ALV-J感染組,MDV感染組和無病毒空白對照組。經(jīng)PCR、間接免疫熒光(IFA)和禽白血病抗原(p27)檢測實(shí)驗(yàn)組接毒成功。熒光定量結(jié)果顯示,在24h,ALV-J和MDV開始復(fù)制,72h前,共感染組細(xì)胞中MDV和ALV-J病毒RNA的復(fù)制速度和復(fù)制量均高于單獨(dú)感染組(P0.05),但由于細(xì)胞出現(xiàn)病變,表達(dá)高峰后共感染組病毒RNA表達(dá)量下降明顯快于單獨(dú)感染組(P0.05),證明了共感染組病毒具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄能力,對細(xì)胞損傷更嚴(yán)重,從而從病毒轉(zhuǎn)錄層面證明了MDV和ALV-J的協(xié)同促進(jìn)復(fù)制和細(xì)胞致病作用;Western Blot結(jié)果顯示共感染72h的各組細(xì)胞蛋白的表達(dá)量出現(xiàn)明顯的差異,共感染組明顯高于單獨(dú)感染組,從而在蛋白層面證明了共感染組兩種病毒協(xié)同促進(jìn)各自蛋白的表達(dá);激光共聚焦結(jié)果顯示,與單獨(dú)感染MDV組相比,共感染組出現(xiàn)病變的時間提前24h,噬斑數(shù)量增加明顯;與單獨(dú)感染ALV-J組相比,相同時間點(diǎn),共感染組感染ALV-J的細(xì)胞數(shù)量更多,病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制量更大,對細(xì)胞的損傷更嚴(yán)重,說明MDV和ALV-J可感染同一細(xì)胞,且具有協(xié)同促進(jìn)各自的復(fù)制能力和感染能力;體外實(shí)驗(yàn)選取了與腫瘤有關(guān)的三種細(xì)胞因子(IL-6、IL-10、TGF-β),通過對此3種細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化,說明共感染能促進(jìn)炎癥反應(yīng)、增加免疫抑制作用、促進(jìn)細(xì)胞分化,兩種病毒能有效改變細(xì)胞微環(huán)境來促進(jìn)病毒表達(dá)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證MDV與ALV-J的體內(nèi)協(xié)同作用,我們進(jìn)行了體內(nèi)感染實(shí)驗(yàn),并在接種后1、3、5周齡連續(xù)剖殺三次。通過病理組織學(xué)和血液學(xué)分析,進(jìn)一步證明了兩種病毒具有協(xié)同致病作用。血液學(xué)檢測顯示,混合感染組外周血白細(xì)胞數(shù)高于單獨(dú)感染組,明顯高于空白對照組,其中淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞數(shù)增加最明顯;通過臨床病理學(xué)、病理組織學(xué)進(jìn)行動態(tài)的病理學(xué)研究。發(fā)病情況結(jié)果顯示,共感染組、ALV-J感染組和MDV感染組分別在3、4周開始死亡,總體死亡率分別為20.0%、3.33%和10.0%。大體病變結(jié)果顯示,混合感染組2~4周肝、脾、腎稍腫大,并有肝周炎、心包炎等,所有組織器官在2周時開始出現(xiàn)以幼稚淋巴細(xì)胞、大中小淋巴細(xì)胞為主的炎性浸潤灶,以4~5周最為明顯,共感染比單獨(dú)感染發(fā)病早1~2周、病變更明顯。提示共感染可加重初期的炎癥反應(yīng),使病死率升高,加快了病毒致瘤進(jìn)程。本研究從不同層面和角度揭示了ALV-J和MDV的協(xié)同復(fù)制及致病作用,不僅對后續(xù)研究ALV-J與MDV協(xié)同機(jī)制明確了方向,更將為禽腫瘤病或其它禽病研究提供科學(xué)的理論依據(jù),為預(yù)防和治療禽腫瘤病提供新的思路。
[Abstract]:The results showed that ALV - J and MDV were co - infected with MDV - J and MDV - MD5 . In order to further verify the co - infection of MDV and ALV - J , the results showed that the co - infection group , ALV - J infection group and MDV infection group started to death at 3 and 4 weeks . The results showed that the co - infection could increase the initial inflammatory response , and the overall mortality rate was 20 . 0 % , 3 . 33 % and 10 . 0 % .
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2003809