發(fā)布時間：2018-05-18 00:26

  本文選題：青枯雷爾氏菌 + 烈性噬菌體��； 參考：《黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：煙草青枯病是由青枯雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一種毀滅性土傳細菌病害,煙株一旦染病即可造成整株死亡,成為制約煙草發(fā)展的重要問題。為減少該病帶來的經(jīng)濟損失,我國在煙草生產(chǎn)中綜合采用生物、化學(xué)、種植抗病品種、調(diào)整煙苗移栽期以及合理輪作等措施加以防治,雖然在一定程度上能夠減少該病引起的損失,但由于青枯雷爾氏菌多樣性高、寄主范圍廣、在土壤中生存能力強等原因,仍無法有效控制該病發(fā)生的危害。于是,人們開始探索一種新型有效的生物防治方法-噬菌體療法,即利用噬菌體防治青枯病正成為研究的熱點。因此發(fā)現(xiàn)并分離出一株新的烈性噬菌體對噬菌體療法具有很大的應(yīng)用價值。本研究以煙草青枯雷爾氏病菌TB15-14、TB15-15為宿主,采用雙層平板法從煙田土壤中分離出青枯雷爾氏菌烈性噬菌體,利用透射電子顯微鏡觀察噬菌體形態(tài)特征,雙層平板測定噬菌體的生物學(xué)特性,采用RAPD-PCR克隆測序技術(shù)、高通量全基因組測序、基因組結(jié)構(gòu)和比較基因組學(xué)分析等方法研究噬菌體遺傳基因特征,為煙草青枯病噬菌體療法提供技術(shù)儲備,同時也為制備噬菌體制劑提供數(shù)據(jù)支持。主要研究結(jié)果如下:1.根據(jù)噬菌體噬菌斑大小的不同,從2株宿主菌中各分離獲得3株噬菌體,經(jīng)透射電子顯微鏡觀察這6株噬菌體都屬于有尾噬菌體目(Caudovirales),短尾噬菌體科(Podoviridae),將以TB15-14為宿主的噬菌體分別命名為RS-PI-1、-2、-3,以TB15-15為宿主的噬菌體命名為RS-PII-1、-2、-3。2.6株噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)差異不大,除一株噬菌體的感染復(fù)數(shù)為0.1外,其余均為1;噬菌體的一步生長曲線中表明,以TB15-15為宿主菌的噬菌體其潛伏期、爆發(fā)期和裂解量比以TB15-14為宿主菌的噬菌體大。3.6株噬菌體不適合高溫環(huán)境,最佳作用溫度在28~40℃之間;當(dāng)pH值超過8以后對以TB15-15為宿主菌的噬菌體影響較大,6株噬菌體的最適pH在3~8之間,不適合堿性生活環(huán)境。4.通過隨機擴增多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn),噬菌體片段RS-PI-3-1與Ralstonia phage RS-PI-1的親緣關(guān)系最近,高達99%,Ralstonia phage RS-PI-1的比對蛋白為假想蛋白,因而推定噬菌體片段RS-PI-3-1也為假想蛋白。結(jié)合生物學(xué)特性分析推定噬菌體片段RS-PI-3-1為新的青枯雷爾氏菌噬菌體。噬菌體片段RS-PII-2-1與Ralstonia phage RS-PII-1的親緣關(guān)系最近為94%,Ralstonia phage RS-PII-1的比對蛋白為DNA解旋酶,因而推定噬菌體片段RS-PII-2-1為DNA解旋酶。通過系統(tǒng)進化樹的分析發(fā)現(xiàn)噬菌體片段RS-PII-2-1與Ralstonia phage RS-PII-1的bootstrap值僅為78%,因而推定噬菌體片段RS-PII-2-1為新的青枯雷爾氏菌噬菌體。5.對噬菌體RS-PI-1和噬菌體RS-PII-1的全基因組測序結(jié)果顯示,它們都都屬于雙鏈閉合環(huán)狀噬菌體。噬菌體RS-PI-1的核苷酸序列全長為43211 bp,GC含量為61.5%,含有48個開放閱讀框;噬菌體RS-PII-1的核苷酸序列全長42042 bp,GC含量為63.2%,有46個開放閱讀框,對2株噬菌體進行全基因組氨基酸比對,并通過噬菌體保守區(qū)域構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,結(jié)果顯示兩株噬菌體覆蓋度僅有10%,覆蓋區(qū)相似性為78%,與其它的青枯雷爾氏菌噬菌體通過系統(tǒng)進化樹和全基因組比較存在一定的差異,因此推定噬菌體RS-PI-1和噬菌體RS-PII-1為兩株全新的烈性青枯雷爾氏菌噬菌體。
[Abstract]:In order to reduce the economic losses caused by the disease , it was found that the phage display was not suitable for the treatment of tobacco bacterial wilt . The results showed that the phage fragment RS - PI - 3 - 1 was a new strain of Ralstonia solanacel.It was estimated that the phage fragment RS - PI - 2 - 1 was a new strain of Ralstonia solanacel.It was estimated that the phage fragment RS - PI - 2 - 1 was a new strain of Ralstonia solanacel.It was estimated that the phage fragment RS - PI - 2 - 1 was a new strain .
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S435.72

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本文編號：1903559