本文選題：牛分枝桿菌 + BCG��； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis,M.bovis)是引起牛結(jié)核病的主要病原,給當(dāng)今養(yǎng)牛業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)壓力,同時(shí)作為一種人獸共患病,牛結(jié)核病也給人類的生命健康帶來了巨大的威脅。M.bovis主要通過呼吸道感染宿主,能夠引起機(jī)體的慢性炎癥性反應(yīng)。BCG是M.bovis的傳代致弱菌株,具有很好的免疫原性,是預(yù)防人結(jié)核病唯一的疫苗。IL-17主要由Th17細(xì)胞分泌產(chǎn)生,在炎癥性反應(yīng)和抗微生物感染過程中具有重要作用,而在M.bovis感染過程中的作用還不是很清楚。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究表明M.bovis可以通過樹突狀細(xì)胞作用于CD4~+T細(xì)胞引起IL-17的表達(dá)上調(diào),而BCG誘導(dǎo)IL-17表達(dá)能力卻較弱。本研究旨在利用建立的小鼠模型來證實(shí)IL-17與Th17細(xì)胞在M.bovis感染中的作用。主要結(jié)果如下:(1)TGF-β,IL-6,IL-1β,IL-23是誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵性細(xì)胞因子,本實(shí)驗(yàn)將M.bovis和BCG以感染比MOI(10:1)感染小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞,24小時(shí)后對(duì)被感染細(xì)胞中誘導(dǎo)Th17分化的關(guān)鍵細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):TGF-β,IL-6,IL-1β,IL-23四個(gè)基因在mRNA水平上的表達(dá)顯著上調(diào),且M.bovis的誘導(dǎo)作用顯著強(qiáng)于BCG。(2)ROR-γt是Th17細(xì)胞的特征性轉(zhuǎn)錄因子,IL-17是Th17細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子。本實(shí)驗(yàn)將M.bovis和BCG感染后的樹突狀細(xì)胞分別和幼稚CD4~+T細(xì)胞共培養(yǎng),24小時(shí)之后對(duì)培養(yǎng)后的細(xì)胞中ROR-γt,IL-17,TGF-β,IL-6,IL-1β,IL-23六個(gè)基因mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):ROR-γt,IL-17,TGF-β,IL-6,IL-1β,IL-23六個(gè)基因在mRNA的表達(dá)水平顯著上調(diào),且M.bovis的誘導(dǎo)作用顯著強(qiáng)于BCG。通過兩個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)推測(cè)M.bovis和BCG能夠通過上調(diào)TGF-β,IL-6,IL-1β,IL-23的表達(dá)來誘導(dǎo)Th17的分化,且M.bovis的誘導(dǎo)作用顯著強(qiáng)于BCG。(3)將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的M.bovis和BCG菌株通過尾靜脈以2×105CFU/只注射至小鼠體內(nèi),分別在感染的第1,4,7,14,21,28,35,42,49,56天稱重和撲殺小鼠,對(duì)小鼠體重及病理變化進(jìn)行了檢測(cè)和分析。感染后的小鼠體重出現(xiàn)不同程度的下降且M.bovis的下降更明顯。感染菌株能夠引起小鼠組織病理學(xué)反應(yīng):M.bovis可以引起小鼠肺臟肺泡壁增厚,巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤,甚至在21天的時(shí)候可以看到典型的結(jié)核結(jié)節(jié)出現(xiàn),而BCG也可以引起相似的炎癥性反應(yīng)但是癥狀較輕。M.bovis對(duì)脾臟的影響主要表現(xiàn)為巨噬細(xì)胞增多,淋巴細(xì)胞減少和紅髓區(qū)淤血導(dǎo)致水腫,而BCG組的癥狀較輕。結(jié)果表明M.bovis和BCG通過尾靜脈注射感染小鼠的動(dòng)物模型構(gòu)建成功。(4)對(duì)感染不同時(shí)間點(diǎn)小鼠脾臟和肺臟中的Th17及IL-17的表達(dá)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明強(qiáng)弱菌株均能夠引起脾臟和肺臟中Th17和IL-17的上調(diào),且IL-17的上調(diào)時(shí)間早于Th17。另外肺臟中IL-17和脾臟相比上調(diào)時(shí)間更早,持續(xù)時(shí)間更長。(5)通過免疫組化對(duì)小鼠脾臟和肺臟中IL-17的分布特點(diǎn)進(jìn)行了的分析。結(jié)果表明強(qiáng)弱菌株誘導(dǎo)的IL-17主要集中在脾臟的紅髓區(qū)、脾小梁以及被膜下,且M.bovis誘導(dǎo)IL-17的表達(dá)高于BCG,而肺臟中IL-17的表達(dá)較少,且主要集中在肺泡內(nèi),肺血管和肺氣管中。綜上所述,本研究證實(shí)M.bovis和BCG感染小鼠誘導(dǎo)了Th17分化及IL-17的表達(dá),且M.bovis誘導(dǎo)能力強(qiáng)于BCG。研究結(jié)果為進(jìn)一步闡明牛結(jié)核的致病機(jī)制提供了重要證據(jù)。
[Abstract]:The results showed that : ( 1 ) TGF - 尾 , IL - 6 , IL - 1尾 , IL - 23 were the key cytokines to induce the differentiation of Th17 cells . The expression of IL - 17 , IL - 6 , IL - 17 , TGF - 尾 , IL - 6 , IL - 1尾 , IL - 23 in spleen and lungs of mice were significantly higher than that of BCG .

【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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1 向志光;林樹柱;董娜;袁偉;徐艷峰;秦川;;結(jié)核分枝桿菌感染小鼠的脾臟和肺臟組織荷菌量與病理變化[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2011年08期

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本文編號(hào)：1795142