本文選題：β-Conglycinin　切入點(diǎn)：抗原表位　出處：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：β-Conglycinin是大豆籽實(shí)中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子之一,但不同種屬動(dòng)物對(duì)大豆的過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度不盡相同。因此本論文在獲得大鼠、仔豬、犢�？功�-Conglycinin血清中的IgG后,采用免疫親和質(zhì)譜法對(duì)大豆β-Conglycinin的酶解肽段上的IgG抗原的線性及構(gòu)象表位進(jìn)行鑒定與篩選。本論文進(jìn)一步揭示了大豆抗原蛋白抗原表位的氨基酸序列,可以對(duì)日后單克隆抗體的制備、飼料原料中抗原蛋白含量的降低、動(dòng)物種屬間致敏差異、動(dòng)物致敏機(jī)理的研究等工作起指導(dǎo)性作用。試驗(yàn)Ⅰ:大鼠、仔豬、犢牛過(guò)敏血清中IgG的純化本試驗(yàn)采用親和層析的方法,使用親和層析柱對(duì)三種過(guò)敏血清進(jìn)行純化,并用直接ELISA法檢測(cè)獲得的IgG。結(jié)果顯示,大鼠、仔豬、犢牛這三種對(duì)大豆敏感的動(dòng)物所產(chǎn)生的過(guò)敏血清在經(jīng)過(guò)親和層析柱后均存在洗脫峰,且峰值高低存在差異。ELISA結(jié)果表明大鼠、仔豬、犢牛血清純化的洗脫峰中均含有抗β-Conglycinin的特異性IgG。以上結(jié)果表明大鼠、仔豬、犢牛三種動(dòng)物均能產(chǎn)生特異性IgG。試驗(yàn)Ⅱ:免疫親和質(zhì)譜法鑒定大豆β-Conglycinin抗原表位本試驗(yàn)采取兩種方法獲得β-Conglycinin的抗原表位,一種方法是將β-Conglycinin先酶解后進(jìn)行免疫共沉淀。另一種方法是將和三種動(dòng)物特異性IgG進(jìn)行免疫共沉淀后酶解。獲得的β-Conglycinin抗原片段委托華大蛋白進(jìn)行Q-E質(zhì)譜檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果與NCBI上β-Conglycinin的三個(gè)亞基進(jìn)行比對(duì)(序列號(hào)為:P13916、P11827和P25974)。結(jié)果顯示,兩種方法均能有效的篩選酶解后的β-Conglycinin片段中的抗原表位部分。三種動(dòng)物之間抗原表位雖然有很大一部分為相同或相似的氨基酸序列,但仍有一部分抗原表位的氨基酸序列存在著很大的差異,有些表位為豬所獨(dú)有的,如LFEITQR,有些表位是大鼠獨(dú)有的表位,如HEWQHKQEK。其中犢牛和大鼠線性表位較為相似,而仔豬的線性表位與兩者差異較大。綜上所述,犢牛,仔豬,大鼠三種動(dòng)物產(chǎn)生抗β-Conglycinin的特異性Ig G的效價(jià)存在差異,且β-Conglycinin致敏不同種屬動(dòng)物時(shí)起作用的抗原表位存在著差異。以上試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步揭示β-Conglycinin對(duì)不同種屬幼齡動(dòng)物致敏性差異的機(jī)理提供理論基礎(chǔ),同時(shí)可以為檢測(cè)試劑盒的研發(fā)提供依據(jù)。
[Abstract]:尾 -Conglycinin is one of the main anti-nutritional factors in soybean seed, but the intensity of allergic reaction to soybean is different among different species of animals. Therefore, the IgG in rat, piglets and calves against 尾 -Conglycinin serum was obtained in this paper. The linear and conformational epitopes of soybean 尾 -Conglycinin peptides were identified and screened by immuno-affinity mass spectrometry. The amino acid sequences of soybean protein epitopes were further revealed. It can guide the preparation of monoclonal antibody, the decrease of antigen protein content in feed raw material, the difference of sensitizing between species and species, the study of animal sensitization mechanism, etc. Test 鈪，

本文編號(hào)：1628250