本文選題：凡納濱對蝦　切入點(diǎn)：副溶血弧菌　出處：《中國海洋大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：多年來,細(xì)菌性和病毒性疾病的發(fā)生和流行,給世界范圍內(nèi)的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。凡納濱對蝦因其耐高溫、鹽度適范圍廣“,且適宜高密度養(yǎng)殖等特點(diǎn)在世界范圍內(nèi)大規(guī)模的養(yǎng)殖,但是隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,許多病害頻繁的出現(xiàn)。白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)是感染養(yǎng)殖對蝦的-種重要的病毒性病原,副溶血弧菌的感染對對蝦養(yǎng)殖的危害也日益嚴(yán)重,病毒與細(xì)菌的交叉或疊加感染引起的對蝦死亡可能更加嚴(yán)重：本論文研究包括三部分：(1)人工培育對蝦苗種體內(nèi)可r培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量及組成分析；(2)副溶血弧菌和WSSV共感染對凡納濱對蝦的成活率的影響：(3)兩株毒力不同的副溶血弧菌和WSSV共感染對凡納濱對蝦存活率的影響。1.人工培育對蝦苗種體內(nèi)可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量及組成分析：為調(diào)查研究不同養(yǎng)殖場攜帶WSSV、IHHNV病毒與不攜帶上述2種病毒的對蝦苗種體內(nèi)可培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量和組成,本章應(yīng)用常規(guī)細(xì)菌分離、培養(yǎng)與純化,細(xì)菌16SrDNA序列分析等方法調(diào)查分析了山東、天津、浙江部分苗種場凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)和中國明對蝦(Fenneorpenaeus chinensis)苗種體內(nèi)的可培養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)以及優(yōu)勢菌的種類和數(shù)量,并用PCR的方法檢測對蝦攜帶病毒情況。結(jié)果顯示,凡納濱對蝦和中國明對蝦苗種體內(nèi)的可培養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)均在105～107CFU/g之間,分離出的細(xì)菌分屬于弧菌屬(Vibrio)、發(fā)光桿菌屬(Photobacterium)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、鹽單胞菌屬(Halomonas)等8個屬,弧菌屬(Vibrio)在對蝦苗種體內(nèi)占絕對優(yōu)勢,達(dá)43.80%-90.23%。凡納濱對蝦和中國明對蝦苗種部分樣品檢測為WSSV和IHHNV陽性,WSSV檢出率為33.33%,IHHNV檢出率為22.22%,同時攜帶兩種病毒的檢出率為11.11%。只攜帶WSSV病毒以及同時攜帶兩種病毒的對蝦苗種體內(nèi)的總菌數(shù)在1.23×107-4.14×107CFU/g之間,顯著高于其他批次的樣品(P0.05),且弧菌數(shù)量在107CFU/g左右,品著高于其他批次的樣品(P0.05)。只攜帶IHHNV以及不攜帶病毒的對蝦苗種體內(nèi)的弧菌數(shù)量為104-106CFU/g。研究表明,弧菌屬在凡納濱對蝦和中國明對蝦苗種體內(nèi)普遍存在且為優(yōu)勢菌屬,并且攜帶WSSV可能會引起對蝦苗種體內(nèi)的弧菌數(shù)量增長。2.副溶血弧菌和WSSV共感染對凡納濱對蝦的成活率的影響：本章通過投喂的方法使凡納濱對蝦感染自斑病,注射的方法使毒力較強(qiáng)的副溶血弧菌在凡納濱對蝦體內(nèi)潛伏感染,并分為先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌,先注射副溶血弧菌后投喂WSSV病料兩種情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。并統(tǒng)計(jì)各組凡納濱對蝦的累積死亡率,用TCBS平板涂布的方法檢測凡納濱對蝦血淋巴中的弧菌數(shù)量,用絕對熒光定量PCR的方法檢測凡納濱對蝦鰓部的WSSV的拷貝數(shù),以及Real-TimePCR方法檢測凡納濱對蝦鰓部的相關(guān)功能基因LvMyD88、LvTube和Lvakt的表達(dá)量。先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌組從開始投喂WSSV病料到實(shí)驗(yàn)第10d死亡率達(dá)到100%.而先投喂WSSV病料后注射PBS組從開始投喂WSSV病料到實(shí)驗(yàn)第13d死亡率達(dá)到100%。先注射副溶血弧菌,后投喂WSSV病料組在從開始投喂WSSV病料到實(shí)驗(yàn)的第lld時凡納濱對蝦的累積死亡率達(dá)到100%,只感染W(wǎng)SSV組在實(shí)驗(yàn)的第13d累積死亡率達(dá)到100%。只注射副溶血弧菌組,弧菌會在凡納濱對蝦的血淋巴中逐漸減少,而其它組的弧菌數(shù)量都顯著的增加(P0.05)。先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌組、先注射副溶血弧菌后投喂WSSV和只投喂WSSV組在投喂WSSV病料后的WSSV拷貝數(shù)分別在72h、96h和144h時由105copies mg-1 tissue迅速升高到107 copies mg-1 tissue。本研究的結(jié)果提示：副溶血弧菌的感染能夠加快WSSV在對蝦體內(nèi)的增殖,WSSV同時也能促進(jìn)副溶血弧菌的繁殖,副溶血弧菌的快速繁殖結(jié)合WSSV的大量增殖導(dǎo)致對蝦的大量死亡。3.兩株毒力不同的副溶血弧菌和WSSV共感染對凡納濱對蝦存活率的影響：本章通過注射的方法用WSSV和兩株毒力不同的副溶血弧菌感染凡納濱對蝦。并分為先注射WSSV粗提液后注射副溶血弧菌,先注射副溶血弧菌后注射WSSV粗提液兩種情況進(jìn)行試驗(yàn)。WSSV為主要病原,兩株毒力不同的副溶血弧菌用較少的劑量在對蝦體內(nèi)潛在感染。并統(tǒng)計(jì)各組凡納濱對蝦的累積死亡率,用TCBS平板涂布的方法檢測凡納濱對蝦血淋巴和肝胰腺中的弧菌數(shù)量,用絕對熒光定量PCR的方法檢測凡納濱對蝦鰓部的WSSV的拷貝數(shù)。結(jié)果證明：(1)WSSV先行感染,副溶血弧菌的二次感染能夠加快凡納濱對蝦的死亡,而副溶血弧菌的二次感染又與弧菌的濃度和菌株的毒力強(qiáng)弱有關(guān)。WSSV在凡納濱對蝦鰓部的復(fù)制與副溶血弧菌的毒力強(qiáng)弱也有關(guān),而凡納濱對蝦體內(nèi)的弧菌數(shù)量與弧菌的毒力強(qiáng)弱無關(guān)。(2)副溶血弧菌先行感染再有WSSV的疊加感染,弧菌毒力的強(qiáng)弱對凡納濱對蝦的死亡率以及WSSV在凡納濱對蝦體內(nèi)的增殖均無較大的影響。
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【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S945.4

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本文編號：1585167