本文關(guān)鍵詞：白木香MAPK3基因的克隆及其表達初探　出處：《東北林業(yè)大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：MAPK信號級聯(lián)系統(tǒng)在植物生長發(fā)育、生物脅迫和非生物脅迫反應(yīng)、激素反應(yīng)等多種信號傳遞途徑中起著十分重要的作用,它負責外來信號的接收傳遞和放大,從而啟動或調(diào)控基因的表達。珍稀瀕危植物白木香是國產(chǎn)沉香的重要來源,健康白木香樹只有受到外界傷害后才能形成沉香類物質(zhì)。前期研究中,我們從白木香中鑒定了一個顯著受傷害誘導表達的倍半萜合酶基因ASS1,并初步鑒定了一系列在傷害反應(yīng)中與ASS1協(xié)同表達的轉(zhuǎn)錄因子和蛋白激酶,其中包括MAPK信號級聯(lián)系統(tǒng)。本論文在此基礎(chǔ)上,對AsMAPK3基因進行克隆與表達分析：1.利用RT-PCR和RACE的方法克隆到白木香AsMAPK3基因的全長cDNA序列,開放閱讀框長1110 bp,編碼369個氨基酸�；诎被嵝蛄械南到y(tǒng)進化分析顯示,本研究獲得MAPK3基因與甜瓜的的MAPK3基因形成一個小的進化枝。預測分析顯示AsMAPK3為親水性蛋白且為不穩(wěn)定蛋白,不穩(wěn)定系數(shù)為41.15,等電點pI 5.42,亞細胞定位結(jié)果顯示,AsMAPK3主要集中在細胞核上。2.以白木香根、莖、葉為實驗材料,對AsMAPK3基因的組織表達情況進行了分析,結(jié)果表明,AsMAPK3在葉子中的表達量最高,其次是莖,花中的表達量最低。對白木香的懸浮細胞進行茉莉酸甲酯和水楊酸兩種化學傷害處理,研究在傷害脅迫下的表達模式,結(jié)果顯示,傷害信號可以調(diào)控AsMAPK3基因表達,在傷害處理24 h內(nèi),基因的表達量有提高,隨后均有明顯降低�；蛟诓煌瑐μ幚硐卤磉_量有所不同。3.利用基因槍法對AsMAPK3的亞細胞定位進行研究,結(jié)果顯示AsMAPK3在洋蔥表皮細胞中定位于細胞膜和細胞核。4.構(gòu)建pET-28a-AsMAPK3的原核表達載體,通過設(shè)計不同的溫度、轉(zhuǎn)速以及IPTG的濃度摸索融合蛋白的最適誘導表達條件。結(jié)果顯示,在37℃下,0.4 mM IPTG誘導4 h,成功誘導出目的融合蛋白。本論文的結(jié)果將為進一步研究AsMAPK3在傷害信號誘導沉香倍半萜合成中的功能及其分子機制奠定基礎(chǔ)。
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【學位授予單位】：東北林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S567.19;Q943.2

【參考文獻】

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1 范衡宇,佟超,孫青原;絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路的研究進展[J];動物學雜志;2002年05期

2 苗成林;孫寶騰;羅麗萍;劉東曉;楊柏云;;動態(tài)頂空進樣-氣質(zhì)聯(lián)用法分析國產(chǎn)沉香化學成分[J];食品科學;2009年08期

3 解文博;葉玲;;p38絲裂原活化蛋白激酶信號通路的部分研究方法[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2009年10期

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本文編號：1354338