本文關(guān)鍵詞：天女木蘭種子萌發(fā)過程microRNA挖掘及其表達(dá)　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：天女木蘭(MagnoliasieboldWiK.Koch)種子具有深休眠特性,萌發(fā)率低,育苗技術(shù)復(fù)雜。開展天女木蘭種子休眠與萌發(fā)相關(guān)研究既有學(xué)術(shù)價(jià)值,又有實(shí)際意義。本研究以天女木蘭為研究材料,基于高通量測(cè)序技術(shù),從轉(zhuǎn)錄水平初步探究了天女木蘭種子萌發(fā)過程中microRNA(miRNA)的表達(dá)調(diào)控,并結(jié)合內(nèi)參基因篩選,進(jìn)行相關(guān)靶基因表達(dá)分析,為后續(xù)深入研究種子萌發(fā)調(diào)控的分子機(jī)制提供了重要信息。主要結(jié)果如下:1.天女木蘭種子總RNA提取困難,傳統(tǒng)方法不適于其RNA提取。經(jīng)多種方法篩選及改良,確定TRIzol結(jié)合CTAB法和一種優(yōu)化的改良TRIzol法均能獲得較高質(zhì)量RNA,且RNA樣品純度高,完整性好,能滿足mRNA和miRNA建庫測(cè)序要求,以及qPCR、RT-PCR等后續(xù)表達(dá)分析要求。2.基于天女木蘭種子萌發(fā)過程轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選出6個(gè)傳統(tǒng)內(nèi)參基因(ACT7、UBQ、GAPDH、ETELF、60SrRNA、β-TUB)和 6 個(gè)新基因(rPS4、TMA7、H2A、B5、ORMDL、Srbp1)作為候選內(nèi)參基因。qRT-PCR分析表明,種子萌發(fā)中TM47表達(dá)最穩(wěn)定,傳統(tǒng)內(nèi)參基因中60S RNA最穩(wěn)定;不同組織中Srbp1和60SRNA表達(dá)最穩(wěn)定。3.基于高通量測(cè)序技術(shù),天女木蘭種子萌發(fā)過程中共鑒定到74個(gè)miRNA,9個(gè)為保守miRNA,65個(gè)為預(yù)測(cè)的新miRNA。其中64個(gè)miRNA在種子萌發(fā)過程中差異表達(dá)。種子吸脹前后有28(12個(gè)上調(diào),16個(gè)下調(diào))個(gè)miRNA差異表達(dá);層積0-30d和30d-60d各有1個(gè)差異表達(dá);60d-75d有22個(gè)(12個(gè)上調(diào),10個(gè)下調(diào))miRNA差異表達(dá),75d-90d有20個(gè)(12個(gè)上調(diào),8個(gè)下調(diào))miRNA差異表達(dá)。說明miRNA在天女木蘭種子萌發(fā)中階段性表達(dá),行使特異功能。4.74個(gè)miRNA共預(yù)測(cè)到1653個(gè)靶基因,其中472個(gè)具有注釋信息。GO注釋分析表明差異表達(dá)miRNA靶基因在生物過程中主要?dú)w類于代謝過程、細(xì)胞生理過程和單組織進(jìn)程(Single-organismprocess);在細(xì)胞組成中主要?dú)w類于細(xì)胞、細(xì)胞器和細(xì)胞膜;在分子功能中主要?dú)w類于分子結(jié)合功能和催化活性功能。5.KEGG通路分析表明,種子吸脹前后、層積催芽0-30d、30d-60d、60d-75d以及75d-90d分別有4、0、0、5和5個(gè)差異路徑富集。說明層積0-60d內(nèi)種子代謝穩(wěn)定,種子吸脹前后、60d-90d代謝差異復(fù)雜。KEGG注釋分類表明,淀粉及蔗糖代謝幾乎伴隨整個(gè)萌發(fā)過程,種子露白前剪切體相關(guān)功能顯著,露白后,植物與病菌間交互作用顯著。6.GAMYB、ABH1及AFB2表達(dá)模式可能與靶標(biāo)它們的miR159、MS-miR23及MS-miR2存在一定調(diào)控關(guān)系,但在天女木蘭種子萌發(fā)過程中,后者是否靶標(biāo)前者還需進(jìn)一步驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S792.99

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1329804