本文關(guān)鍵詞：貓皰疹病毒Ⅰ型gI基因序列分析及PCR檢測方法的建立　出處：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：貓病毒性鼻氣管炎(Feline viral rhinotracheitis,FVR)又稱貓傳染性鼻氣管炎,是由貓皰疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type 1,FHV-1)引起貓科動物的一種急性高度接觸性傳染病,以上呼吸道癥狀為特征。主要侵害幼貓,發(fā)病率可高達(dá)100%,病死率50%。成年貓也可感染但病死率低,康復(fù)動物多成為帶毒動物可間歇性向體外排毒。該病在臨床癥狀上很難與貓其它上呼吸道疾病鑒別,目前獸醫(yī)臨床對該病尚未有快速準(zhǔn)確的診斷方法,只能通過較為復(fù)雜繁瑣的實驗室診斷來確診該病。但無論病原分離培養(yǎng)還是血清學(xué)診斷,因?qū)嶒炛芷陂L、敏感性差等原因均未大范圍的應(yīng)用于臨床。PCR診斷方法克服了傳統(tǒng)實驗室診斷的諸多弊端是診斷該病較為理想的方法。本實驗旨在建立一種特異性強、敏感性高的檢測FHV-1的PCR方法。根據(jù)GenBank發(fā)表的FHV-1基因序列選取gI基因為靶基因設(shè)計合成特異性引物,對疑似病料進行PCR擴增并克隆FHV-1 gI全基因和制備標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒。對已建立的PCR診斷方法進行優(yōu)化同時對已優(yōu)化PCR診斷方法進行敏感性、特異性、重復(fù)性試驗驗證,并依賴本實驗建立的FHV-1 PCR方法對46份臨床樣本進行檢測。結(jié)果成功從疑似病料中擴增出FHV-1 gI基因并對其克隆制備標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒,對質(zhì)粒測序分析顯示所克隆的FHV-1 gI基因全長1155 bp與FHV-1各分離株同源性均在99.7%以上,進化樹分析結(jié)果顯示與澳大利亞株(KR381787.1)親緣關(guān)系最近。同時對PCR方法優(yōu)化確定最佳退火溫度為56℃C,最低檢測DNA模板濃度為3.23×103 copies/μL(即最低可檢測136.5 fg/μL的目標(biāo)DNA)。在特異性檢測方面該方法可特異性檢出FHV-1無法檢出犬細(xì)小病毒(CPV)、犬瘟熱病毒(CDV)、綿羊肺炎支原體(Movis)、牛支原體(M.bovis)、牛皰疹病毒Ⅰ型(BHV-1)。另外運用本實驗所建立的PCR診斷方法對46份臨床待檢樣本進行檢測,檢出陽性為28份,陽性率為60.87%,對陽性樣本PCR產(chǎn)物進行序列分析與GenBank登錄的FHV-1代表株同源性均為99%以上。表明所建立的PCR診斷方法具有特異性強,敏感性高的特點,可運用于臨床樣本的快速、準(zhǔn)確的檢測。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

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本文編號：1328973