本文關(guān)鍵詞：磷酸化鈣調(diào)蛋白轉(zhuǎn)錄因子在番茄花柄脫落過程中的表達(dá)及SR2L轉(zhuǎn)基因分析　出處：《沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：植物器官脫落是指植物體的某一部分脫離母體的過程,作為自然界普遍發(fā)生的現(xiàn)象,是植物對(duì)環(huán)境適應(yīng)的重要手段之一。而在作物生產(chǎn)過程中,非正常的脫落過程,如果菜類蔬菜等花、果器官的脫落則是影響作物產(chǎn)量的重要因素。目前對(duì)脫落過程的調(diào)控機(jī)制仍不十分清楚。蛋白質(zhì)磷酸化是一種翻譯后的修飾方式,在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程中起著重要作用,且在植物器官脫落過程中發(fā)揮著重要調(diào)控作用。本論文在前期番茄花柄脫落過程中磷酸化蛋白鑒定的基礎(chǔ)上,選擇了鈣調(diào)蛋白轉(zhuǎn)錄因子家族作為研究對(duì)象,分析不同鈣調(diào)蛋白轉(zhuǎn)錄因子在脫落中的表達(dá)水平,并選取與脫落過程密切相關(guān)的鈣調(diào)蛋白轉(zhuǎn)錄因子,構(gòu)建轉(zhuǎn)基因體系,為明確其在脫落過程中的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ)。論文的主要研究結(jié)果如下:(1)以離體番茄花柄為試材,通過乙烯、1-MCP、Ca~(2+)、EGTA處理,調(diào)查了花柄脫落率,并對(duì)SR1L、SR2、SR2L、SR3、SR3L、SR4在不同時(shí)間表達(dá)量變化進(jìn)行分析。結(jié)果表明,只有SR2L在基因水平變化不明顯。結(jié)合本課題組前期乙烯處理下不同花柄脫落時(shí)間離區(qū)的磷酸化肽分析結(jié)果,其磷酸化水平差異顯著,但翻譯和轉(zhuǎn)錄水平均變化不明顯,即SR2L的磷酸化作用與脫落過程密切相關(guān)。所以,從中選取磷酸化鈣調(diào)轉(zhuǎn)錄因子SR2L來對(duì)脫落過程中的磷酸化蛋白進(jìn)行研究。(2)通過TA克隆載體pMD18-T的介導(dǎo),將SR2L和SR2LSS914A基因與質(zhì)粒相連,構(gòu)建了啟動(dòng)子為CaMV35S的表達(dá)載體pB7YWG2-SR2L,pB7YWG2-SR2LS914A。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)番茄子葉進(jìn)行侵染,經(jīng)過篩選獲得抗性幼苗。本次實(shí)驗(yàn)共獲得TO代植轉(zhuǎn)PB7YWG2-SR2L基因的陽(yáng)性植株3株,轉(zhuǎn)pB7YWG2-SR2L S914A基因的陽(yáng)性植株4株。TO代轉(zhuǎn)化率分別為2.9%,4.1%。(3)選擇515nm的激發(fā)波長(zhǎng),對(duì)得到的植株根部進(jìn)行激光共聚焦檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與野生型"中蔬六號(hào)番茄"相比,轉(zhuǎn)基因植株的側(cè)根分生區(qū)細(xì)胞核區(qū)域中出現(xiàn)明顯的黃色熒光信號(hào)。所以將鈣調(diào)轉(zhuǎn)錄因子SR2L定位在番茄表皮的細(xì)胞核中。分別對(duì)TO以及T1代植株P(guān)CR檢測(cè)、進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)、激光共聚焦檢測(cè),表明目的基因已經(jīng)成功整合到番茄基因組中,并在轉(zhuǎn)錄水平上得到了鑒定。(4)通過結(jié)合磷酸酶抑制劑處理對(duì)番茄離體花柄外植體脫落的影響以及對(duì)T1代轉(zhuǎn)pB7YWG2-SR2LS914A植株脫落情況。本試驗(yàn)得出兩個(gè)推測(cè):經(jīng)過激光共聚焦試驗(yàn)將SR2L定位于細(xì)胞核內(nèi),SR2L有可能是在細(xì)胞核內(nèi)與EIN2結(jié)合,發(fā)生了去磷酸化的作用,從而調(diào)控EIN3的應(yīng)答;SR2L也可能直接與EIN3的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合來參與乙烯調(diào)控的脫落反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S641.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1321181