本文關(guān)鍵詞：藍(lán)莓類擬盤多毛孢病菌鑒定及生物學(xué)特性研究

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【摘要】：類擬盤多毛孢真菌(Pestalotiopsis-like fungi)引起的病害是藍(lán)莓生產(chǎn)中的重要病害之一,造成減產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)損失。隨著藍(lán)莓種植不斷地向新的地區(qū)發(fā)展,不同的種植環(huán)境也造成了病害發(fā)生的多樣性。鑒于我國(guó)藍(lán)莓品種的差異性,種植條件的復(fù)雜性以及類擬盤多毛孢真菌的多樣性,推測(cè)在不同種植環(huán)境下為害藍(lán)莓的類擬盤多毛孢真菌種類亦有所區(qū)別。為明確為害我國(guó)藍(lán)莓的類擬盤多毛孢真菌的種類,并為此類真菌病害的防治提供理論基礎(chǔ),本研究采用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法,對(duì)分離自藍(lán)莓的類擬盤多毛孢真菌進(jìn)行鑒定,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究。1.類擬盤多毛孢真菌形態(tài)學(xué)鑒定2013年-2016年,在我國(guó)11個(gè)藍(lán)莓主要產(chǎn)區(qū)采集藍(lán)莓葉斑病、枝枯病等病害樣品,經(jīng)過(guò)分離純化及致病性測(cè)定,得到類擬盤多毛孢菌株共53株,其中7株無(wú)致病力,46株具有致病力,且致病力存在明顯分化。葉斑病病害癥狀表現(xiàn)為初期病斑呈黃褐色,圓形或近圓形,隨病斑擴(kuò)展,病斑邊緣出現(xiàn)深褐色暈圈,后期部分葉片病斑上產(chǎn)生黑色分生孢子盤。枝枯病癥狀表現(xiàn)為初期病斑呈褐色,隨病斑擴(kuò)展,病斑邊緣有深褐色暈圈,部分葉片和枝梢變褐枯死,后期整枝枯死,傷口處產(chǎn)生黑色分生孢子盤。對(duì)類擬盤多毛孢病菌進(jìn)行菌落培養(yǎng)性狀的觀察,并制作徒手切片、冷凍切片、臨時(shí)裝片進(jìn)行分生孢子、產(chǎn)孢細(xì)胞等形態(tài)特征的觀察。結(jié)果顯示各供試菌株菌落形態(tài)多樣:多數(shù)為白色,有或無(wú)輪紋,子實(shí)體均為黑色,分布密集或稀疏。分生孢子均包含5個(gè)細(xì)胞,中間3個(gè)細(xì)胞著色,兩端細(xì)胞無(wú)色透明,具有2根或2根以上的頂端附屬絲,基部附屬絲1根或2根,各菌株的分生孢子形態(tài)存在差異。按照中間色胞顏色、產(chǎn)孢細(xì)胞形態(tài)及分生孢子梗的有無(wú)可分為2個(gè)類群:(1)Pestalotiopsis屬,分生孢子中間色胞同色,產(chǎn)孢細(xì)胞無(wú)色透明,壁薄,光滑,分生孢子梗明顯;(2)Neopestalotiopsis屬,分生孢子中間色胞異色,產(chǎn)孢細(xì)胞無(wú)色透明,壁薄,光滑,分生孢子梗模糊。2.類擬盤多毛孢病菌分子鑒定本研究采用最大簡(jiǎn)約法(MaximumParsimony,MP)和貝葉斯法(Bayesian Inference,BI)對(duì)供試菌株核糖體大亞基(Large Ribosomal Subunit,LSU)基因進(jìn)行分析,對(duì)類擬盤多毛孢病菌進(jìn)行屬的區(qū)分,并采用最大似然法(Maximum Likelihood,ML)和最大簡(jiǎn)約法(Maximum Parsimony,MP)對(duì)聯(lián)合 rDNA-ITS、β-tubulin 和 tef1 基因進(jìn)行分析,區(qū)分不同的種,同時(shí)結(jié)合形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行鑒定。鑒定結(jié)果顯示,為害我國(guó)藍(lán)莓產(chǎn)區(qū)的類擬盤多毛孢真菌主要為Neopestalotiopsis屬和Pestalotiopsis屬真菌。其中,N.chrysea是引起我國(guó)福建長(zhǎng)汀藍(lán)莓枝枯病的病原菌,P.trachicarpicola是引起我國(guó)廣西桂林藍(lán)莓葉斑病的病原菌。綜合致病性測(cè)定結(jié)果可以得出Neopestalotiopsis和Pestalotiopsios屬部分真菌均可侵染藍(lán)莓葉片和枝條,引起葉斑病和枝枯病。3.類擬盤多毛孢病菌生物學(xué)特性研究通過(guò)對(duì)不同類群代表菌株進(jìn)行生物學(xué)特性研究,結(jié)果顯示不同類群的生物學(xué)特性存在一定差異。葡萄糖為類擬盤多毛孢真菌菌絲生長(zhǎng)的最適碳源;硝酸鈉為N.chrysea菌絲生長(zhǎng)的最適氮源,甘氨酸為P.trachicarpicola菌絲生長(zhǎng)的最適氮源;PDA為類擬盤多毛孢真菌菌絲生長(zhǎng)的最適培養(yǎng)基;供試菌株在10 ℃-30℃范圍內(nèi)均能夠生長(zhǎng),適宜生長(zhǎng)溫度均為25 ℃-28℃,光照條件對(duì)供試菌株的菌絲生長(zhǎng)快慢影響不明顯;供試菌株在pH為4-9范圍內(nèi)均能夠生長(zhǎng),N.chrysea菌絲最適pH為8,SCCD01Cb(Neopestalotiopsis sp.)適宜 pH 為 5-6,P.trachicarpicola最適 pH 為 4,YN06F(Pestalotiopsis sp.)最適 pH為6。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S436.639

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本文編號(hào)：1306378