本文關(guān)鍵詞：芍藥再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究

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【摘要】：芍藥(Paeonia lactiflora Pall.)是我國(guó)傳統(tǒng)名花,古時(shí)被稱為"花相",是常用的造景植物,不僅能夠供人們觀賞,有些品種還有一定的藥用價(jià)值。芍藥具有復(fù)雜的休眠特性,導(dǎo)致繁殖周期長(zhǎng)、系數(shù)低,傳統(tǒng)的育種方法很難進(jìn)行品種快速改良,而分子育種為芍藥的性狀改良提供了可行的方法。再生體系的建立為育種及品種改良奠定了理論基礎(chǔ),對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的研究為分子育種提供參考依據(jù)。而國(guó)內(nèi)外對(duì)芍藥再生及遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)鮮有研究,所以應(yīng)盡快完善再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立。本試驗(yàn)以芍藥種子為試驗(yàn)材料,通過胚培養(yǎng)獲得無菌苗。以種胚及無菌苗子葉、真葉、胚軸為試驗(yàn)材料,進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)、增殖及分化的研究。同時(shí)以芍藥胚性愈傷組織為受體材料進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化的研究,篩選轉(zhuǎn)化條件。主要研究結(jié)果如下:1.種子消毒方式為:75%的酒精浸泡30s,HgCl_2浸泡5min。打破種胚休眠的最佳啟動(dòng)培養(yǎng)基為:MS+GA_30.5mg-L~(-1),胚苗生長(zhǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+GA_30.5mg·L + KT 1.0 mg·L~(-1) 和 GA_3 0.5 mg·L~(-1)+ 6-BA 1.0 mg·L~(-1)。2.誘導(dǎo)愈傷組織最佳試驗(yàn)材料為種胚和子葉,在培養(yǎng)基1/2MS + TDZ 0.5 mg·L~(-1) +2,4-D 0.2 mg·L~(-1)上誘導(dǎo)效果最佳,并且種胚在此培養(yǎng)基能誘導(dǎo)出胚性愈傷組織。愈傷組織最佳增殖培養(yǎng)基為 1/2MS + TDZ 0.2 mg·L~(-1) + 2,4-D 0.5 mg·L~(-1) + NAA 0.5 mg·L~(-1)。誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基為1/2MS + TDZ 0.2 mg·L-+ NAA 0.5 mg L~(-1)�；九囵B(yǎng)基中添加0.1 mg·L~(-1) IAA時(shí)能夠誘導(dǎo)不定根分化。3.以Kan濃度5 mg·L~(-1)作為芍藥胚性愈傷組織的抗性選擇壓。以Cef濃度200 mg·L~(-1)作為抑菌劑濃度,在此濃度下能夠有效抑制農(nóng)桿菌的過度繁殖,并且對(duì)植物材料影響較小。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的芍藥胚性愈傷組織最佳轉(zhuǎn)化條件為菌液濃度OD600=0.6,浸染時(shí)間25 min,共培養(yǎng)3d,延遲培養(yǎng)2d。4.本試驗(yàn)在Kan 5 mg·L~(-1)的選擇壓條件下,選擇培養(yǎng)2次后共獲得13塊抗性胚性愈傷組織。經(jīng)PCR檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果初步表明目的基因已經(jīng)整合到胚性愈傷組織細(xì)胞中。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S682.12

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本文編號(hào)：1301417