本文關(guān)鍵詞：重組PEDV-S1枯草芽孢桿菌免疫原性研究

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【摘要】：豬流行性腹瀉病毒(PEDV)能夠引起仔豬嚴(yán)重腹瀉,給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。PEDV S蛋白是能夠產(chǎn)生中和抗體的主要結(jié)構(gòu)蛋白�？莶菅挎邨U菌是一種非致病性、綠色安全的益生菌,被證明能夠成功用于抗原呈遞。為構(gòu)建PEDV S蛋白的重組枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng),獲得PEDV候選微生態(tài)制劑,達(dá)到預(yù)防PED的目的。本研究以PEDV S1基因?yàn)槟康幕?以枯草芽孢桿菌為遞呈載體,鑒定了重組枯草芽孢桿菌pLA-PEDVS1/Bacillus subtilis。通過(guò)Western blot、間接免疫熒光與流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)重組蛋白的表達(dá)。Western blot檢測(cè)到大小為81 kDa的蛋白,即外源蛋白能夠與豬源PEDV抗血清結(jié)合,說(shuō)明目的蛋白具有良好的反應(yīng)原性。間接免疫熒光與流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明外源蛋白PEDV S1獲得了表達(dá)。為研究重組菌pLA-PEDV-S1/Bacillus subtilis的免疫原性,本實(shí)驗(yàn)以小鼠為動(dòng)物模型,通過(guò)灌胃方式口服重組枯草芽孢桿菌。在免疫后不同時(shí)間采集小鼠血液、糞便、氣管洗液和小腸洗液,測(cè)定特異性IgG水平、IgG亞類水平和特異性sIgA水平。通過(guò)MTT法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的增殖能力,中和試驗(yàn)檢測(cè)特異性抗體對(duì)病毒的反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,pLA-PEDV-S1/B.Subtilis在免疫小鼠后,小鼠血清抗PEDV的特異性IgG抗體水平升高;對(duì)糞便樣品、氣管洗液和小腸洗液的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抗PEDV特異性s IgA抗體水平明顯增高;IgG亞類分析結(jié)果表明IgG1是產(chǎn)生的主要抗體,其次是IgG2a和IgG2b;特異性血清IgG和腸洗液sIgA抗體能夠中和PEDV;T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果表明試驗(yàn)組的SI顯著高于對(duì)照組。綜上所述,重組枯草芽孢桿菌pLA-PEDV-S1/B.Subtilis免疫小鼠產(chǎn)生了黏膜免疫和系統(tǒng)免疫。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.4

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本文編號(hào)：1298055