本文關(guān)鍵詞：枯草芽胞桿菌MEP代謝路徑基因簇分析及重組菌株構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 枯草芽胞桿菌 MEP代謝路徑 轉(zhuǎn)錄單元 重組菌株

【摘要】：枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)是一種理想的被廣泛地應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究的對(duì)植物病原真菌具有拮抗作用的生防細(xì)菌。目前已明確,枯草芽胞桿菌中存在參與MEP代謝途徑的相關(guān)基因及其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和功能,但參與MEP代謝途徑的各個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄單元卻鮮有研究,同時(shí)有關(guān)枯草芽胞桿菌是否可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建具備影響害蟲(chóng)天敵行為重組菌株的相關(guān)報(bào)道較少。本研究以枯草芽胞桿菌(B.subtilis)916菌株為研究對(duì)象,旨在闡述參與MEP代謝途徑相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄概況,并構(gòu)建重組生防菌株,以影響害蟲(chóng)天敵的行為。利用生物信息學(xué),以枯草芽胞桿菌Bs168為參考對(duì)象,結(jié)合KEGG和NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)分析Bs916菌株中參與MEP代謝途徑和FPP合成的dxs,dxr,isp D,isp F,ip K,isp G,isp H,idi和isp A 9個(gè)基因在基因組中的分布情況,同時(shí)通過(guò)BLAST進(jìn)行氨基酸相似性比對(duì)。結(jié)果表明這9個(gè)基因散布于Bs916菌株基因組中,其所編碼的氨基酸與Bs168相應(yīng)基因所編碼氨基酸相似性均高于73%。通過(guò)測(cè)定Bs916在LB中的生長(zhǎng)曲線,結(jié)合反轉(zhuǎn)錄PCR明確參與MEP代謝途徑和FPP合成的9個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄時(shí)期。結(jié)果表明:上述9個(gè)基因在菌株生長(zhǎng)的指數(shù)期和穩(wěn)定期都進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。以T4時(shí)期菌株為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,利用RT-PCR確定9個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄單元,同時(shí)通過(guò)5′RACE技術(shù)確定1-脫氧-5-磷酸-D-木酮糖合成酶(Dxs)的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):dxs與isp A共轉(zhuǎn)錄,與其它5個(gè)基因共同形成大小為6352 bp的多順?lè)醋?dxr與其它19個(gè)基因共同形成大小為19355 bp的轉(zhuǎn)錄單元;isp D與isp F緊鄰,中間間隔8 bp的核苷酸與其它20個(gè)基因共同形成大小為18580 bp的轉(zhuǎn)錄單元;idi與其下游的1個(gè)基因形成大小為3413 bp的轉(zhuǎn)錄單元;ip K與其它4個(gè)基因形成大小為2535 bp的轉(zhuǎn)錄單元;isp G與其上游的2個(gè)基因形成大小為2954 bp的轉(zhuǎn)錄單元;isp H與其下游的1個(gè)基因形成大小為819 bp的轉(zhuǎn)錄單元。Dxs的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)C位于編號(hào)為KO64_RS11240基因翻譯起始密碼子上游157 bp處。通過(guò)基因工程技術(shù),構(gòu)建具有影響害蟲(chóng)天敵行為的枯草芽胞桿菌菌株。結(jié)果表明:具有優(yōu)化后編碼橙花叔醇和香葉基芳樟醇合成酶的PITPS4基因在枯草芽胞桿菌916菌株具有轉(zhuǎn)錄活性。本研究明確了枯草芽胞桿菌916菌株MEP代謝途徑相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄情況,為枯草芽胞桿菌MEP代謝路徑相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄分析提供依據(jù);同時(shí)初步完成含有PITPS4基因的重組菌株構(gòu)建,為今后研制高效具有影響害蟲(chóng)天敵行為的枯草芽胞桿菌菌株奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S476.1

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊家軍;許月英;章薇;;富鉻枯草芽胞桿菌培養(yǎng)條件的探究[J];糧食與飼料工業(yè);2013年11期

2 常維山,張春陽(yáng),牛鐘相,朱立賢,謝幼梅;產(chǎn)蛋白酶枯草芽胞桿菌益生菌種的篩選與應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧雜志;2003年03期

3 金志雄,王婭,吳新剛;溫度對(duì)枯草芽胞桿菌α-淀粉酶活性的影響[J];生物技術(shù);2004年02期

4 王麗萍;彭德奎;陳守文;喻子牛;孫明;;枯草芽胞桿菌重組木聚糖酶基因高效表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2007年01期

5 秦瑤;王葦;郭秉嬌;王熙楚;周霞;王曉蘭;;土源枯草芽胞桿菌的分離鑒定及生物學(xué)特性研究[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年01期

6 廉新慧;張高娜;劉鳳芝;李春鳳;谷巍;;枯草芽胞桿菌在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J];畜牧與飼料科學(xué);2012年10期

7 湯東生;蔣其軍;毛忠順;潘俊;陸進(jìn);何霞紅;;果園雜草對(duì)枯草芽胞桿菌控制石榴枯萎病的增效作用[J];植物保護(hù);2012年03期

8 陳營(yíng),桂遠(yuǎn)明,陳曉剛;幾種離子和有機(jī)化合物對(duì)枯草芽胞桿菌蛋白酶活力的影響[J];大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年02期

9 王啟軍;陳守文;喻子牛;;一種改進(jìn)的分離純化枯草芽胞桿菌產(chǎn)脂肽抗生素的方法[J];孝感學(xué)院學(xué)報(bào);2007年06期

10 劉芳,梁運(yùn)祥;綠色熒光蛋白基因?qū)莶菅堪麠U菌的標(biāo)記[J];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王軼;陳振民;晉婷婷;陳向東;;通過(guò)自溶酶相關(guān)基因的敲除提高枯草芽胞桿菌產(chǎn)量[A];2013年湖北省暨武漢微生物學(xué)會(huì)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2013年

2 晉婷婷;王軼;趙明明;陳向東;;枯草芽胞桿菌細(xì)胞間遺傳重組過(guò)程的基本特性研究[A];2012年湖北生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展高端論壇暨湖北省生物工程學(xué)會(huì)2012年度學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2012年

3 晉婷婷;王軼;趙明明;陳向東;;枯草芽胞桿菌細(xì)胞間遺傳重組過(guò)程的基本特性研究[A];2012年第五屆全國(guó)微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2012年

4 王軼;陳振民;沈萍;陳向東;;通過(guò)自溶酶相關(guān)基因的敲除提高枯草芽胞桿菌生物量[A];2012年湖北生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展高端論壇暨湖北省生物工程學(xué)會(huì)2012年度學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2012年

5 王軼;陳振民;沈萍;陳向東;;通過(guò)自溶酶相關(guān)基因的敲除提高枯草芽胞桿菌生物量[A];2012年鄂粵微生物學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)——湖北省暨武漢微生物學(xué)會(huì)成立六十年慶祝大會(huì)論文集[C];2012年

6 王軼;陳振民;晉婷婷;陳向東;;通過(guò)自溶酶相關(guān)基因的敲除提高枯草芽胞桿菌產(chǎn)量[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編（2009-2013）[C];2013年

7 王軼;陳振民;沈萍;陳向東;;通過(guò)自溶酶相關(guān)基因的敲除提高枯草芽胞桿菌生物量[A];2012年第五屆全國(guó)微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2012年

8 張曉明;晉婷婷;胡忠生;張揚(yáng);陳向東;;枯草芽胞桿菌細(xì)胞間遺傳重組特性的基本研究[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編（2009-2013）[C];2013年

9 晉婷婷;王軼;趙明明;陳向東;;枯草芽胞桿菌細(xì)胞間遺傳重組過(guò)程的基本特性研究[A];2012年鄂粵微生物學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)——湖北省暨武漢微生物學(xué)會(huì)成立六十年慶祝大會(huì)論文集[C];2012年

10 胡小加;江木蘭;張學(xué)江;;枯草芽胞桿菌在油菜根莖葉的定殖動(dòng)態(tài)和生防作用研究[A];廿一世紀(jì)微生物學(xué)發(fā)展前沿與應(yīng)用新技術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 羅楚平;枯草芽胞桿菌Bs916產(chǎn)羅克霉素、表面活性素、桿菌霉素和泛革素的結(jié)構(gòu)鑒定、合成途徑及生物學(xué)功能[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 陳振民;通過(guò)培養(yǎng)基優(yōu)化和相關(guān)基因敲除提高枯草芽胞桿菌的產(chǎn)量[D];武漢大學(xué);2011年

3 王啟軍;枯草芽胞桿菌B6-1產(chǎn)脂肽和聚-γ-谷氨酸及抗幾種植物病原菌的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 江昊;聚γ谷氨酸在枯草芽胞桿菌和大腸桿菌中的生物合成[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高毓晗;產(chǎn)surfactin枯草芽胞桿菌168重組菌株構(gòu)建及其對(duì)黃瓜枯萎病的控制作用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 肖華;一種新型枯草芽胞桿菌制劑在斷奶仔豬上的應(yīng)用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 肖亞靜;枯草芽胞桿菌MEP代謝路徑基因簇分析及重組菌株構(gòu)建[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2017年

4 劉慰;一株枯草芽胞桿菌的分離鑒定及其殺蟲(chóng)活性的研究[D];湖南師范大學(xué);2013年

5 吳成超;多酶型枯草芽胞桿菌的發(fā)酵工藝優(yōu)化與應(yīng)用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 錢風(fēng)光;高效生防菌枯草芽胞桿菌的篩選及其發(fā)酵工藝優(yōu)化[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 王水明;進(jìn)出境皮毛加工工藝pH和溫度對(duì)殺滅病原微生物影響的調(diào)查[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 田化平;海洋枯草芽胞桿菌DM03抗病原真菌物質(zhì)的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 吳莉莉;cry2Ab基因載體的構(gòu)建及其在枯草芽胞桿菌中的表達(dá)[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

10 彭燦;枯草芽胞桿菌TR21誘導(dǎo)香蕉產(chǎn)生的抗病生理生化特性[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1296009