洛陽地區(qū)煙草根際土壤拮抗細(xì)菌的篩選鑒定
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【摘要】:煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物,土傳病原真菌對煙草的危害越來越重。生產(chǎn)上缺乏多抗品種,農(nóng)業(yè)措施不能有效防治病害,常規(guī)的化學(xué)防治易導(dǎo)致環(huán)境污染及煙葉農(nóng)藥殘留,生物防治因?qū)ι鷳B(tài)環(huán)境無破壞作用,且防效持久而受到重視。細(xì)菌是土壤中數(shù)量最多的一類微生物,拮抗細(xì)菌的研究一直是生物防治研究的熱點(diǎn)之一。本研究在洛陽市宜陽縣、洛寧縣、嵩縣和汝陽縣,采集了煙草不同生育期與不同植煙年限的根際土壤樣品共30份,采用稀釋平板法分離并統(tǒng)計菌落數(shù)量,對峙培養(yǎng)法與牛津杯法測定純菌落對煙草土傳病原真菌的抑制效果,依據(jù)形態(tài)特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析鑒定拮抗菌株的種類,結(jié)果如下。(1)經(jīng)稀釋平板法測定,洛陽地區(qū)煙草根際土樣中細(xì)菌菌落數(shù)平均數(shù),宜陽縣為5.273×107 cfu/g,嵩縣為7.304×107 cfu/g,洛寧縣為7.312×107 cfu/g,汝陽縣為5.218×107 cfu/g。(2)經(jīng)純化培養(yǎng),共獲得180個細(xì)菌單菌落。采用平板對峙培養(yǎng)法初步測定,篩選出94株對煙草疫霉、瓜果腐霉、尖孢鐮刀菌具有拮抗作用,其中對3種土傳病原真菌均有拮抗作用的有10株,對煙草疫霉有拮抗作用的有79株,對瓜果腐霉有拮抗作用的有16株,對尖孢鐮刀菌有拮抗作用的有69株。(3)用牛津杯法測定,G111、G12、G122、G51、G52、J71、J72、L31、O42、S331、S3312、S3341、S61、YJ71、YJ72、YJ73、Y1B2計17株的發(fā)酵液對煙草疫霉和尖孢鐮刀菌至少一種有一定的拮抗作用。(4)采用結(jié)晶紫草酸銨染色法對篩選獲得的17個純菌株與實(shí)驗(yàn)室保存的MS621、MS622、TS1112、TS6114、TS681、TS682、TS683計7個純菌株進(jìn)行革蘭氏染色反應(yīng),結(jié)果均為革蘭氏陽性菌,且產(chǎn)生芽孢。(5)依據(jù)《常見細(xì)菌鑒定手冊》測定24株細(xì)菌的厭氧性、耐鹽性以及對不同碳源、檸檬酸鹽、丙二酸鹽的利用等反應(yīng)特征,將菌株G111、G12、G122、G51、G52、J71、J72、L31、MS621、MS622、O42、S331、S3312、S3341、S61、TS1112、TS6114、YJ71、YJ72、YJ73、Y1B2鑒定為芽孢桿菌屬細(xì)菌;TS681、TS682、TS683鑒定為類芽孢桿菌屬細(xì)菌。(6)通過24株細(xì)菌16S r DRNA序列比對分析,結(jié)合其形態(tài)學(xué)與生理生化鑒定結(jié)果,將菌株G51、G52、J71、J72、L31、O42、S331、S3312、S3341、S61、TS1112、TS6114、YJ71、YJ72、YJ73、Y1B2鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis);菌株G111、G12、G122、MS621、MS622鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens);菌株TS681、TS682、TS683鑒定為多粘類芽胞桿菌(Paenibacillus polymyxa)。本試驗(yàn)在形態(tài)學(xué)、生理生化與分子生物學(xué)水平上鑒定了洛陽煙田根際土壤中拮抗細(xì)菌的種類,測定了其對煙草土傳病原真菌的室內(nèi)拮抗效果,在洛陽煙區(qū)煙草根際土壤中首次發(fā)現(xiàn)了多粘類芽孢桿菌,可為進(jìn)一步研究與利用細(xì)菌防控?zé)煵莶『μ峁┲匾獏⒖肌?br/> 【學(xué)位授予單位】:河南科技大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:S435.72;S476.1
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,本文編號:1295721
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