本文關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒gB蛋白單抗的制備及夾心ELISA檢測PRV方法的建立

  更多相關(guān)文章： 偽狂犬病 偽狂犬病毒 gB蛋白 單克隆抗體 夾心ELISA

【摘要】：偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是世界動物衛(wèi)生組織(OIE)通報的傳染病,也是“國家中長期動物疫病防治規(guī)劃(2012-2020)”中被列為優(yōu)先防治的豬病之一,其病原體為偽狂犬病毒(PRV),也稱為奧耶斯基氏病毒(ADV),在分類上屬于皰疹病毒科,α-皰疹病毒亞科,水痘病毒屬。PRV可感染多種哺乳動物,包括豬、食肉動物、嚙齒動物和反芻動物。臨床上PRV感染以新生仔豬呈現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)紊亂和死亡、成年豬表現(xiàn)呼吸困難、母豬繁殖障礙為特征,給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。自2011年以來,一種高致病力的PRV變種在中國許多地區(qū)接種疫苗的豬群中出現(xiàn),給該病的防控提出了新的挑戰(zhàn),因此,建立快速有效的診斷檢測方法對控制和根除PR具有重要的意義。偽狂犬病毒gB糖蛋白是偽狂犬病毒包膜的主要成分,由913個氨基酸(aa)組成,屬于高度保守的皰疹病毒糖蛋白,介導病毒穿入的過程和細胞至細胞的傳播,在誘導保護性免疫中起重要作用,被認為是制備亞單位疫苗最有希望的備選蛋白基因。雙抗體夾心ELISA方法是檢測抗原最常用的方法,該方法特異性強,敏感,易于操作,并且經(jīng)濟、省時,尤其適合大規(guī)模的流行病學調(diào)查。本研究應(yīng)用PCR技術(shù)擴增出PRV gB基因,并將克隆的目的片段連接到表達載體p GEX-4T-1,構(gòu)建了原核表達重組質(zhì)粒p GEX-4T-1-B。以表達純化的PRV gB重組蛋白為抗原,制備了單克隆抗體和兔源多克隆抗體,以此建立了檢測PRV抗原的雙抗體夾心ELISA方法,并對吉林省某地區(qū)的豬群感染PRV的情況進行了流行病學調(diào)查。結(jié)果表明,本研究建立的雙抗體夾心ELISA方法具有特異、敏感、簡便與快速等優(yōu)點,可用于PRV病毒抗原的快速檢測,為今后PRV的診斷和流行病學調(diào)查研究提供了技術(shù)手段。流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn),偽狂犬病毒在吉林省某地區(qū)豬群的感染率為5.6%~11.7%,且妊娠母豬陽性率高達11.7%,為該地區(qū)偽狂犬病的防治提供了理論依據(jù)。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 萬超;溫國元;潘茲書;張楚瑜;熊中良;楊峻;艾地云;;快速檢測偽狂犬病毒熒光定量PCR技術(shù)建立及應(yīng)用[J];Virologica Sinica;2006年05期

2 劉博濤;宋昌軍;劉翊中;;偽狂犬病毒致病機理的研究進展[J];西北民族大學學報(自然科學版);2008年04期

3 彭蕓蕓;仲曉寧;李春蕾;;偽狂犬病毒載體的研究進展[J];山東畜牧獸醫(yī);2013年05期

4 丁建華,付烈振,王家富,羅滿林,謝小虎,張楚瑜;偽狂犬病毒表達載體的構(gòu)建[J];武漢大學學報(自然科學版);1997年06期

5 李建;曹娟;廖園園;劉潔;朱微;秦偉;秦紅剛;漆世華;謝紅玲;;偽狂犬病毒單克隆抗體的制備和鑒定[J];中國獸藥雜志;2014年03期

6 曹瑞兵;周國棟;周海霞;包晶晶;陳溥言;;豬β干擾素在畢赤酵母中的分泌表達及其對偽狂犬病毒的抑制作用[J];微生物學報;2006年03期

7 黃現(xiàn)青;魏戰(zhàn)勇;高曉平;韓慶功;崔艷紅;;表面活性素體外抗偽狂犬病毒活性研究[J];生物學雜志;2009年04期

8 田志軍;仇華吉;倪健強;周艷君;蔡雪輝;周國輝;王云峰;童光志;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學特性分析(英文)[J];遺傳學報;2005年12期

9 童武;張青占;鄭浩;劉飛;姜一峰;單同領(lǐng);周艷君;童光志;;免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J];中國動物傳染病學報;2013年03期

10 汪銘書，郭萬柱，婁高明，費恩閣，宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜分析[J];中國病毒學;1994年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王金果;涂健;趙德明;;酸化條件對偽狂犬病毒清除效果的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

2 王卓妍;朱家明;任芙蓉;;噻唑橙對血漿中偽狂犬病毒滅活效果的研究[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

3 郝鵬;阿蘭;;PK-15、ST細胞增殖偽狂犬弱毒效果的比較[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學、獸醫(yī)微生物學學術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

4 林春麗;王英;張寶琚;烏日娜;韓小梅;袁智慧;;不同的保存條件對偽狂犬病毒感染力的影響實驗[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

5 江云波;方六榮;肖少波;張輝;潘永飛;羅銳;李彬;陳煥春;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒兩種膜相關(guān)蛋白重組偽狂犬病毒的免疫反應(yīng)和免疫保護研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2006學術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

6 魏振明;陳霖普;戴朝杰;李怡英;;偽狂犬病毒弱毒株若干生物學特性（摘要）[A];福建省畜牧獸醫(yī)學會第七次會員代表大會暨學術(shù)研討會論文集[C];1994年

7 嚴琳;牟帆;陳煥春;;重組豬白細胞介素2在小鼠模型中對偽狂犬病毒弱毒疫苗的佐劑效應(yīng)[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物微生態(tài)學分會第三屆第七次學術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 何雁南;王蕩;徐卓菲;姚清俠;司有輝;錢平;陳煥春;;豬瘟、口蹄疫重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學特性[A];2006年度學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

9 田志軍;仇華吉;童光志;蔡雪輝;倪健強;周艷君;王云峰;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定[A];全國首屆動物生物技術(shù)學術(shù)研討會論文集[C];2004年

10 田志軍;仇華吉;倪健強;周艷君;蔡雪輝;孔令達;王云峰;童光志;;表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒構(gòu)建及其生物學特性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會成立20周年慶典暨第十次學術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉飛;偽狂犬病毒變異株感染細胞的microRNA表達譜及病毒抗原性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 宋云峰;豬2型圓環(huán)病毒核酸疫苗及重組偽狂犬病毒二價基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2006年

3 徐建祥;偽狂犬病毒IE180基因反義RNA轉(zhuǎn)基因動物研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2000年

4 宋巖;表達PRV-vp4基因的重組桿狀病毒和重組偽狂犬病毒的構(gòu)建[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2006年

5 田志軍;表達PRRSV GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2005年

6 黃偉堅;偽狂犬病毒上海株P(guān)K～-缺失株及PK～-gG～-雙缺失株的構(gòu)建及免疫原性初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2006年

7 郭洪;偽狂犬病毒IE180和EP0基因的表達調(diào)控[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2008年

8 謝立蘭;偽狂犬病毒和豬傳染性胃腸炎病毒誘導β干擾素產(chǎn)生的分子機制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

9 聶浩;弓形蟲—偽狂犬病毒重組二價基因工程疫苗研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

10 肖少波;偽狂犬病毒gC基因“自殺性”DNA疫苗及VP22蛋白轉(zhuǎn)導的免疫增強效應(yīng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2004年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭佃磊;檢測抗偽狂犬病毒抗體膠體金免疫層析方法的建立及初步評價[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 李元果;圈養(yǎng)野生動物偽狂犬病病毒分離、鑒定與基因分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2015年

3 劉莎莎;豬源IFITM3抗乙型腦炎病毒和偽狂犬病毒的效果和機制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

4 薄宗義;豬細小病毒—博卡病毒—偽狂犬病毒三價基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 陳功;偽狂犬病毒與宿主3D基因組層面互作研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2016年

6 袁振岳;偽狂犬病毒多肽抗體的制備及神經(jīng)元體外培養(yǎng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2016年

7 梁勛;利用CRISPR/Cas9和Cre/lox系統(tǒng)構(gòu)建偽狂犬病毒雙基因缺失活疫苗[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2016年

8 曹艷云;偽狂犬病毒變異株JS-2012和基因缺失株JS-2012-Δgl/gE感染小鼠的組織分布和致病性試驗[D];揚州大學;2016年

9 朱前磊;豬圓環(huán)病毒Ⅱ型ORF2和豬IL-2基因重組豬偽狂犬病毒的構(gòu)建[D];河南農(nóng)業(yè)大學;2012年

10 楊濤濤;湖南省4株偽狂犬病毒的分離鑒定與培養(yǎng)高滴度偽狂犬病毒的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學;2015年

，

本文編號：1273356