發(fā)布時間：2017-12-07 06:26

  本文關(guān)鍵詞：三種跨膜蛋白對腦心肌炎病毒體外增殖的作用研究

  更多相關(guān)文章： CD63 TMEM39A VCAM-1 腦心肌炎病毒 RNA干擾 過表達 感染

【摘要】：腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditisvirus,EMCV)為能造成腦炎、心肌炎、神經(jīng)性疾病、生殖障礙及糖尿病等疾病的人畜共患病原體。腦心肌炎的爆發(fā)流行,對人類公共衛(wèi)生及養(yǎng)殖業(yè)均造成了較大的經(jīng)濟損失。近幾年,對于EMCV的疫情調(diào)查、診斷和監(jiān)測研究越來越多,但其感染、復(fù)制以及致病的分子機制仍不明確,因此,及時開展EMCV的相關(guān)研究十分迫切。本實驗室通過酵母雙雜交篩選與EMCV的結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3相互作用的宿主細胞蛋白,已初步篩選到CD63、TMEM39A、VCAM-1與EMCVVP1/VP2/VP3存在相互作用。且之前的許多研究已證明,此三種膜蛋白均為參與調(diào)節(jié)多種病毒增殖的重要宿主蛋白。酵母雙雜交試驗結(jié)果提示CD63、TMEM39A、VCAM-1可能參與EMCV感染宿主細胞。因此,本研究將對此推斷進行驗證。利用瞬時過表達/基因敲低技術(shù)來調(diào)控這三種膜蛋白在宿主細胞中的表達量,并驗證其過表達與敲低效果。在此基礎(chǔ)上進行病毒感染分析,探討三種膜蛋白對EMCV在宿主細胞中增殖的影響。通過RT-PCR從細胞中擴增三種膜蛋白全長cDNA并克隆到pCDNA3.1整合表達載體中;用重組表達載體與空載體轉(zhuǎn)染細胞,之后將實驗組細胞與對照組細胞感染EMCV;分別在24h與48h后收樣,分別通過qRT-PCR與TCID50檢測EMCV復(fù)制與致病性的變化。與此同時,通過RNAi敲低細胞中三種膜蛋白的表達并感染EMCV,分別在24h與48h后收樣,通過qRT-PCR與TCID50檢測EMCV復(fù)制與致病性的變化。EMCV感染試驗證明CD63、TMEM39A表達降低后EMCV增殖也隨之降低,表達增高后EMCV增殖也隨之增高,且存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);VCAM-1表達降低后EMCV增殖隨之升高,表達增高后EMCV增殖隨之降低,且存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。以上試驗結(jié)果表明三種細胞膜蛋白表達改變可導(dǎo)致病毒在宿主細胞中的增殖發(fā)生變化,提示CD63、TMEM39A、VCAM-1與EMCV在宿主細胞中的增殖相關(guān),為進一步研究EMCV感染機制提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

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本文編號：1261480