本文關(guān)鍵詞：新鐵炮百合GPAT基因抗寒功能的初步驗證

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【摘要】：本試驗以新鐵炮百合為試驗材料,用百合GPAT基因全長序列設(shè)計PCR引物和雜交探針,利用qRT-PCR技術(shù),通過時空兩個方面研究溫度脅迫下百合GPAT基因的表達(dá)模式,研究GPAT基因在百合不同的發(fā)育時期(苗期,開花期,綠果期)的轉(zhuǎn)錄水平,分析GPAT基因轉(zhuǎn)錄水平與生長發(fā)育的關(guān)系。結(jié)合溫度變化及脂肪酸組成和含量的測定數(shù)據(jù),分析GPAT基因轉(zhuǎn)錄水平與脂肪酸組成和含量的關(guān)系。利用Western Blot技術(shù),在蛋白質(zhì)水平上進(jìn)一步驗證其時間表達(dá)特性,揭示其發(fā)揮生理作用的主要時期。具體的試驗結(jié)果如下所示:1.對整株活體苗期、花期、綠果期的新鐵炮百合進(jìn)行不同時間不同溫度的處理,利用氣相色譜技術(shù),測定百合葉片中的脂肪酸含量(棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸),分析不飽和脂肪酸含量的變化。其中,飽和脂肪酸中棕櫚酸含量最高約占總含量的20%～30%,不飽和脂肪酸中亞麻酸含量最高約占總含量的30%～50%。在4℃處理時對百合的生長發(fā)育影響較大,低溫下亞油酸和亞麻酸變化較大,從而提高植物耐寒性。2.對整株活體苗期、花期、綠果期的新鐵炮百合的葉片、根、花進(jìn)行不同溫度不同時間的處理,利用實時熒光定量PCR技術(shù),測定百合GPAT基因的表達(dá)量。數(shù)據(jù)分析顯示,在葉片、根部和花瓣這三種組織部位中,葉片中的GPAT基因的表達(dá)量最高,這說明GPAT基因在綠色組織中的表達(dá)高,這與基因定位在葉綠體上一致。在百合苗期、開花期和綠果期三個發(fā)育時期中,4℃低溫對苗期和綠果期影響較大,其中苗期的GPAT基因的表達(dá)量高于綠果期,說明苗期是GPAT基因發(fā)揮作用的主要時期。3.利用western雜交技術(shù),在蛋白水平上進(jìn)一步驗證,4℃低溫對整株活體苗期、花期、綠果期的新鐵炮百合的葉片GPAT蛋白表達(dá)量變化的影響。雜交圖片顯示,4℃低溫對苗期和綠果期影響較大,對花期百合影響較小。在苗期4h時GPAT蛋白表達(dá)量下降,表示葉片受到低溫的迫害影響;在8h蛋白表達(dá)量上升達(dá)到最大值:16h蛋白表達(dá)量下降后24h恢復(fù)正常表達(dá)水平。在綠果期,低溫處理下的蛋白表達(dá)量均高于正常水平,與實時熒光定量PCR測定結(jié)果一致,說明在綠果期GPAT基因的表達(dá)量升高從而提高植物抗寒性。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S682.29

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