發(fā)布時間：2017-11-25 04:29

  本文關(guān)鍵詞：大鼠對不同錳源吸收的差異及機制研究

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【摘要】：本論文包括體內(nèi)與體外兩個試驗：試驗1研究飼糧鐵水平對大鼠賴氨酸錳吸收的影響；試驗2利用大鼠原代小腸上皮細胞模型,研究鐵水平和賴氨酸轉(zhuǎn)運載體抑制劑或促進劑對賴氨酸錳吸收的影響；探討賴氨酸錳在大鼠小腸中吸收的可能機制。試驗一：飼糧鐵水平和不同錳源對大鼠錳吸收的影響試驗1采用3×2因子設(shè)計,選用54只21日齡雄性大鼠(Sprague Dawley:SD)(平均體重為55.9土4.3 g),隨機分為6個處理組,每個處理9個重復(fù)。飼糧鐵水平設(shè)低鐵(2.63 mg/kg飼糧,L-Fe)、中鐵(32.91 mg/kg飼糧,A-Fe)和高鐵(179.69 mg/kg飼糧,H-Fe)3個水平；錳源設(shè)硫酸錳(M)和賴氨酸錳(L)(添加10 mg Mn/kg飼糧);即6個處理組分別為ML-Fe、MA-Fe、MH-Fe、LL-Fe、LA-Fe和LH-Fe。試驗期為21天。結(jié)果表明：(1)賴氨酸錳組大鼠血漿和十二指腸中錳水平顯著高于(P0.001)硫酸錳組；與低鐵組相比,中鐵和高鐵顯著降低了大鼠血漿和十二指腸中的錳含量LA-Fe和LH-Fe組大鼠血漿和十二指腸中的錳含量與ML-Fe組無顯著差異。飼糧中的鐵水平、錳源和二者的互作對肝臟中錳含量影響不顯著(P0.13)。(2)與低鐵組相比,中鐵和高鐵組十二指腸二價金屬轉(zhuǎn)運載體1(divalent metal transporter 1, DMT1) mRNA水平顯著降低(P0.01)。在中鐵水平條件下,賴氨酸錳組十二指腸DMT1 mRNA水平顯著低于(P0.05)硫酸錳組：但在低鐵和高鐵條件下,二者無顯著差異(P0.10)。飼糧鐵水平和錳源及二者的互作對十二指腸膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白(Ferroportin1, FPN1) mRNA水平無顯著影響(P0.12)。(3)與低鐵組相比,高鐵降低了(P0.05)大鼠肝臟DMT1和FPN1 mRNA水平。在低鐵和中鐵條件下,賴氨酸錳組和硫酸錳組大鼠肝臟DMT1 mRNA水平無顯著差異；但在高鐵條件下,相對于硫酸錳,賴氨酸錳降低了(P0.05)DMT1 mRNA表達水平。(4)與低鐵組相比,高鐵降低了(P0.05)大鼠十二指腸DMT1、FPN1和肝臟DMT1蛋白水平,但對肝臟FPN1蛋白水平無顯著影響。在高鐵條件下,相對于硫酸錳,賴氨酸錳降低了(P0.05)十二指腸DMT1、FPN1和肝臟DMT1蛋白水平。以上結(jié)果提示,大鼠對賴氨酸錳的吸收大于對硫酸錳吸收；飼糧鐵水平可能通過DMT1和FPN1影響大鼠對賴氨酸錳的利用：賴氨酸錳可以通過二價錳離子的轉(zhuǎn)運載體被大鼠十二指腸吸收。試驗二：原代培養(yǎng)大鼠小腸上皮細胞對賴氨酸錳的吸收研究試驗2首先建立大鼠原代培養(yǎng)小腸上皮細胞模型,然后利用此模型進行賴氨酸錳吸收機制研究。在細胞培養(yǎng)液中分別作如下處理：1)添加0、10或50μM的鐵；2)添加賴氨酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)y+的抑制劑NEM (N-ethylmaleimide)或空白培養(yǎng)液；3)添加賴氨酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)bo,+的促進劑CHX (Cycloheximide).處理10分鐘后再添加0.25mM Mn(來源于硫酸錳和賴氨酸錳)。結(jié)果表明：相對于硫酸錳,賴氨酸錳顯著增加(P0.001)腸上皮細胞對錳的吸收(P0.05)。在培養(yǎng)液中添加鐵降低了(P0.05)腸上皮細胞對錳的吸收。與硫酸錳相比,賴氨酸錳降低了(P0.01)腸上皮細胞底膜FPN1 mRNA表達水平,但對頂膜DMT1 mRNA水平無顯著影響(P0.06)。添加NEM降低了(P0.001)賴氨酸錳來源錳的吸收,但對硫酸錳來源錳的吸收無顯著影響(P0.10)。添加CHX增加了(P＜0.001)賴氨酸錳來源錳的吸收,但對硫酸錳來源錳的吸收無顯著影響(P0.10)。相比于硫酸錳,賴氨酸錳增加了(P0.01)賴氨酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)y+成員堿性氨基酸轉(zhuǎn)運體1 (cationic amino acid transporter 1, CAT1)、轉(zhuǎn)運系統(tǒng)b0'+組成亞基rBAT和b0,+AT mRNA表達水平。此結(jié)果表明,賴氨酸錳可能通過賴氨酸轉(zhuǎn)運載體CAT1和轉(zhuǎn)運系統(tǒng)b0,+被大鼠小腸上皮細胞吸收。以上兩個試驗的研究結(jié)果表明,大鼠對賴氨酸錳的吸收大于硫酸錳；賴氨酸錳除了可以通過Mn2+轉(zhuǎn)運途徑被大鼠小腸吸收外,還可能通過賴氨酸轉(zhuǎn)運載體CAT1和轉(zhuǎn)運系統(tǒng)b0,+被大鼠小腸上皮細胞吸收。
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S816

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