本文關(guān)鍵詞：不同來源產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌株對不同環(huán)境因子的抗性研究

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【摘要】：產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌(Listeriaes monocytogenes,LM)是重要的人畜共患病原菌及毒力最強(qiáng)的食源性病原菌,LM的致病性與毒力基因密切相關(guān),缺失毒力基因可以導(dǎo)致其致病性的消失或下降。而不同環(huán)境因子作用于LM后是否影響其毒力基因表達(dá),從而喪失其已有的毒力,不同來源分離株LM對不同環(huán)境因子的耐受性是否相同等仍不清楚。本研究以食源性LM標(biāo)準(zhǔn)株、綿羊腦炎LM分離株(LM90)及青貯飼草分離株LM(LM19)作為試驗(yàn)菌株,分別采用不同溫度、PH值、氯化鈉濃度、紫外線進(jìn)行作用,通過檢測LM的生長狀態(tài)、毒力因子、主要毒力基因的表達(dá)情況,以確定不同來源LM分離株對不同環(huán)境因子的抗性,為進(jìn)一步探討LM的保菌機(jī)制、維持致病力機(jī)制及食源性LM傳播控制提供參考。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1、不同來源LM對不同理化因子的抗性采用不同溫度、p H、氯化鈉濃度、紫外線作用不同來源LM,通過活菌計(jì)數(shù)和吸光度檢測觀察細(xì)菌生長狀況。結(jié)果62℃30分鐘和72℃30分鐘三株LM均生長,其中食源性LM對熱抗性最強(qiáng)、LM19最弱,100℃時(shí)三株LM均不生長,提示巴氏消毒方法對處理污染LM的食品時(shí)存在安全隱患;低溫環(huán)境4℃/10d、4℃/20d、-20℃/10d和-20℃/20d下LM仍存活,4℃較-20℃更利于LM生長,其中LM19對低溫的抗性最強(qiáng),LM90最弱,提示低溫冷藏和冷凍對受LM污染的食品不影響LM的生存活性;不同PH及鹽濃度生長試驗(yàn)顯示Ph4-10時(shí)三株LM均生長良好,ph2-3活菌數(shù)很少,其中LM19抗酸性最強(qiáng),食源性LM最弱,說明食品保存應(yīng)在保證不影響食品品質(zhì)的前提下盡可能選酸性條件保存,制備青貯時(shí)保持在p H4以下,可控制青貯中LM的生長;在1-7%濃度鹽環(huán)境中三株LM生長良好,隨著鹽濃度增大,存活率逐漸下降,其中以LM90的抗鹽性最強(qiáng),在10%以上鹽濃度下三株LM趨于不生長,從而間接說明腌制食品受LM污染的風(fēng)險(xiǎn)較小;在紫外線照射時(shí)間超過90min時(shí)才能完全殺滅LM,其中以LM19的抗性最強(qiáng)。因此,紫外線用于微生物實(shí)驗(yàn)超凈工作臺(tái)消毒時(shí),照射時(shí)間最好達(dá)到90min以上。2、不同來源LM受不同理化因子作用后其毒力因子變化三株LM受溫度為-20℃-72℃處理后均出現(xiàn)β溶血現(xiàn)象;pH2-10的環(huán)境下,三株LM均出現(xiàn)β溶血圈;在1%-18%鹽濃度時(shí)三株LM均出現(xiàn)明顯β溶血現(xiàn)象;不同時(shí)間紫外線照射后,食源性LM和LM90在0-90min均出現(xiàn)溶血現(xiàn)象,LM19在0-60min出現(xiàn)了溶血圈。磷脂酶試驗(yàn)顯示,三株LM在-20℃-72℃溫度下、p H2-10及1%-18%鹽濃度時(shí)三株LM周邊均出現(xiàn)乳白色暈圈現(xiàn)象,顯酶活性陽性反應(yīng),且圈的大小無明顯差異;紫外線照射顯示食源性LM和LM90在0-90min時(shí)磷脂酶陽性,LM19在0-60min均為陽性。3、不同來源LM受不同理化因子作用后其毒力基因的變化三株LM除在100℃不生長外,其余-20℃-72℃生長的細(xì)菌均通過PCR擴(kuò)增出hly毒力基因目的片段(743bp)和prf A毒力基因目的片段(715bp);在p H2-10生長的細(xì)菌均通過PCR擴(kuò)增出hly和prf A毒力基因目的片段;鹽濃度在1%-18%下生長的細(xì)菌均通過PCR擴(kuò)增出hly和prf A毒力基因目的片段,紫外線照射后均通過PCR檢測到hly和prf A毒力基因目的片段。上述研究結(jié)果表明,不同來源LM在不同理化因子作用后,其生長存活性狀與其主要毒力因子溶血素和磷脂酶變化及毒力基因Hly和毒力調(diào)控因子Prf A的表達(dá)呈一致性,環(huán)境因子只能影響其生存活性,不影響其毒力;從而推出環(huán)境因子能影響其生存活性,但對毒力基因Hly和毒力調(diào)控因子Prf A影響不大;不同來源LM對不同理化因子的抗性差異不明顯。研究結(jié)果進(jìn)一步論證了LM對多種理化因子有很強(qiáng)的抗性及容易造成食品污染的風(fēng)險(xiǎn)。
【關(guān)鍵詞】：產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌 環(huán)境因子 磷脂酶 prfA hly
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述 單核細(xì)胞增生李斯特菌研究進(jìn)展12-23
• 1 單核細(xì)胞增生李斯特菌的流行病學(xué)特征13-16
• 1.1 病原學(xué)特征13-14
• 1.2 血清學(xué)特征14
• 1.3 流行特點(diǎn)14-16
• 2 單核細(xì)胞增生李斯特菌主要的毒力因子及毒力調(diào)控因子16-20
• 2.1 溶血素(LLO)16-17
• 2.2 磷脂酶C (PLC)17-18
• 2.3 肌動(dòng)蛋白酶（ActA）18
• 2.4 內(nèi)化素(Internalins)18
• 2.5 PrfA18-19
• 2.6 SigmaB因子19-20
• 3 單核細(xì)胞增生李斯特菌環(huán)境應(yīng)激相關(guān)的調(diào)節(jié)因子20-21
• 3.1 熱應(yīng)激20
• 3.2 酸應(yīng)激20
• 3.3 滲透壓應(yīng)激20-21
• 4 單核細(xì)胞增生李斯特菌的預(yù)防控制21-23
• 4.1 國內(nèi)預(yù)防措施21-22
• 4.2 國外預(yù)防措施22-23
• 第二章 試驗(yàn)研究23-38
• 試驗(yàn)一 不同來源LM對不同理化因子的抗性23-31
• 摘要23-24
• 1 材料24
• 1.1 菌株24
• 1.2 試劑24
• 1.3 儀器24
• 2 方法24-26
• 2.1 菌種復(fù)蘇24
• 2.2 LM標(biāo)準(zhǔn)曲線24-25
• 2.3 不同環(huán)境因子處理LM菌株25
• 2.4 OD值的測定25
• 2.5 活菌計(jì)數(shù)25-26
• 3 結(jié)果26-30
• 3.1 不同來源LM的標(biāo)準(zhǔn)生長曲線26
• 3.2 OD值及細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果26-30
• 4 討論30-31
• 試驗(yàn)二 不同來源LM受不同理化因子作用后其毒力因子(溶血素、磷脂酶)的檢測31-34
• 摘要31
• 1 材料31-32
• 1.1 菌株31
• 1.2 主要試劑及培養(yǎng)基31-32
• 1.3 主要儀器32
• 2 方法32
• 2.1 培養(yǎng)基的制備32
• 2.2 溶血試驗(yàn)32
• 2.3 磷脂酶試驗(yàn)32
• 3 結(jié)果32-33
• 3.1 溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 3.2 磷脂酶實(shí)驗(yàn)33
• 4 討論33-34
• 試驗(yàn)三 不同來源LM受不同理化因子作用后其毒力基因的PCR檢測34-38
• 摘要34-35
• 1 材料35
• 1.1 菌株35
• 1.2 主要試劑35
• 1.3 主要儀器35
• 2 方法35-36
• 2.1 引物設(shè)計(jì)與合成35
• 2.2 PCR擴(kuò)增體系的建立35-36
• 2.3 PCR產(chǎn)物的檢測36
• 3 結(jié)果36-37
• 4 討論37-38
• 全文結(jié)論38-39
• 創(chuàng)新點(diǎn)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 附件45-46
• 1、作者簡介45
• 2、在學(xué)校期間參與的研究課題45
• 3、發(fā)表論文45-46
• 石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表46

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1127018