研究目的:研究生物支架膠原蛋白結(jié)合中醫(yī)外科治療慢性創(chuàng)面經(jīng)典方“生肌玉紅膏”調(diào)節(jié)人源脂肪干細(xì)胞(hADSCs)旁分泌促進(jìn)血管新生的體內(nèi)外機制。研究內(nèi)容:提取、分離、培養(yǎng)人來源的脂肪干細(xì)胞;制備和評測生肌玉紅膠原;根據(jù)芯片結(jié)果結(jié)果和生物信息學(xué)分析,篩選生肌玉紅原調(diào)控脂肪干細(xì)胞功能時,差異最大的小分子核糖核酸(microRNA;miRNA)和長鏈非編碼核糖核酸(lncRNA)及他們與預(yù)測靶向蛋白p38之間的關(guān)系;裸鼠下肢缺血模型實驗驗證體外實驗及部分前期實驗所得結(jié)果。研究方法:1.膠原蛋白酶消化離心法分離提取人源性脂肪干細(xì)胞,誘導(dǎo)成脂、成骨、成軟骨多向分化并染色鑒定,流式檢測細(xì)胞表面抗原鑒定脂肪干細(xì)胞;2.用醇提法提取生肌玉紅提取液,與膠原蛋白結(jié)合后評價其粘附率和對所提脂肪干細(xì)胞的增殖影響;3.RT-qPCR驗證基因芯片分析的實驗組中表達(dá)差異最顯著的miRNA,慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默該基因,熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá),檢測miRNA和p38的表達(dá)水平,檢驗生肌玉紅膠原對miRNA和p38表達(dá)的逆轉(zhuǎn)作用;4.同篩選miRNA方法篩選基因芯片預(yù)測差異lncRNA中差異最顯著的lncRNA,檢測沉默m...

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２光鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察圖（放大倍數(shù)：１００、２００）??３．２?ｈＡＤＳＣｓ三向誘導(dǎo)分化及鑒定??３．２．１成脂誘導(dǎo)、鑒定??

?第二章人源脂肪干細(xì)胞的提娶鑒定及膠原制備???３．實驗結(jié)果??３．１?ｈＡＤＳＣｓ分離培養(yǎng)??健康患者腹部抽脂術(shù)后的脂肪組織顆粒懸液（圖１－１）經(jīng)消化、提純后，被接種于含??間充質(zhì)干細(xì)胞專用完全培養(yǎng)基（ＭＳＣＭ）的１０ｃｍ培養(yǎng)皿中。光鏡下觀察，可見培養(yǎng)基中??懸浮著圓形、獨立、....

圖１－３三向誘導(dǎo)提純細(xì)胞分化實驗鏡下觀察圖（放大倍數(shù)：１００）??

?南京中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文???成脂誘導(dǎo)過程中細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，油紅〇染色（圖１－３?Ａ）后鏡下可見部分細(xì)??胞的胞漿中出現(xiàn)橘紅色細(xì)小脂質(zhì)顆粒，細(xì)胞形態(tài)變圓，并且細(xì)胞內(nèi)有多個圓形空泡，是細(xì)??胞分化為脂肪細(xì)胞的證明。??３．２．２成骨誘導(dǎo)、鑒定??成骨誘導(dǎo)培過程中細(xì)胞生長快....

圖１－６生肌玉紅膏提取液提取流程圖??２．２生肌玉紅膠原的制備??

?南京中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文???２．１生肌玉紅膏提取液的制備［２３６］??生肌玉紅膏提取液由江蘇省中醫(yī)院制劑部制備，當(dāng)歸６份，甘草６份，白芷６份，??紫草６份，血竭２．４份，訶子６份，黃蜀葵花６份。具體提取方法如下：??①按配方量取當(dāng)歸、甘草、訶子和黃蜀葵花，予８倍重量的７０ｖ....

圖１－８與生肌玉紅膠原復(fù)合生長的ｈＡＤＳＣｓ??

?第二章人源脂肪干細(xì)胞的提娶鑒定及膠原制備???３．實驗結(jié)果??３．１生肌玉紅膠原??制備完成的生肌玉紅提取液消毒密封于ｌＯＯｍＬ玻璃瓶，室溫保存?zhèn)溆谩龈珊蟮哪z原??疏松柔軟，結(jié)合生肌玉紅膏提取液后質(zhì)地稍硬，成品見圖１－７。??ｎ?■??＿＿?國＿??（Ａ）?（Ｂ）??圖１－７....

本文編號：3909168