結(jié)直腸癌（CRC）已經(jīng)成為世界上發(fā)病率和死亡率排名第三的惡性腫瘤,每年造成超過(guò)五十萬(wàn)例患者的死亡。許多研究人員試圖揭示NRF2在結(jié)直腸癌中的復(fù)雜作用。轉(zhuǎn)錄因子NRF2在結(jié)直腸癌中起著雙刃劍的作用。5-氟尿嘧啶（5-Fu）和喜樹堿（CPT）是治療結(jié)直腸癌最常用的化療藥物。不幸的是,多藥耐藥仍然是結(jié)直腸癌有效化療的主要障礙之一。幾項(xiàng)研究揭示了NRF2過(guò)度表達(dá)與結(jié)直腸癌患者對(duì)5-Fu耐藥增加之間的關(guān)系。另有研究表明,乳腺癌對(duì)紫杉醇的耐藥性也與NRF2的過(guò)度表達(dá)有關(guān)。在本研究中,我們主要研究了結(jié)直腸癌細(xì)胞對(duì)喜樹堿和紫杉醇耐藥性的分子機(jī)制。NRF2是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要轉(zhuǎn)錄因子。NRF2通過(guò)識(shí)別啟動(dòng)子中的抗氧化反應(yīng)元件（AREs）來(lái)調(diào)節(jié)下游基因的轉(zhuǎn)錄。這些基因編碼了參與各種病理生理過(guò)程的酶,形成了交叉互作的酶網(wǎng)絡(luò)。在細(xì)胞穩(wěn)態(tài)條件下,NRF2的蛋白水平和轉(zhuǎn)錄活性相對(duì)較低。目前研究發(fā)現(xiàn),三個(gè)E3泛素連接酶復(fù)合物能夠調(diào)控NRF2的泛素化和蛋白酶體降解。盡管NRF2的E3泛素連接酶及其泛素化過(guò)程已經(jīng)得到了充分的研究,但是調(diào)節(jié)NRF2穩(wěn)定性的去泛素化酶（DUBs）卻仍然是未知的。因此,調(diào)節(jié)NRF2活性的D... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
論文創(chuàng)新點(diǎn)
中文摘要
Abstract
中英文縮略對(duì)照表
第一章 結(jié)直腸癌及NRF2的研究進(jìn)展
    1.1 結(jié)直腸癌
        1.1.1 結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展
        1.1.2 結(jié)直腸癌的分子機(jī)制
        1.1.3 腸癌的治療
    1.2 NRF2 的研究進(jìn)展
        1.2.1 NRF2-ARE信號(hào)通路
        1.2.2 NRF2 的調(diào)控
        1.2.3 NRF2 與耐藥
    1.3 泛素化與去泛素化系統(tǒng)
        1.3.1 泛素化系統(tǒng)
        1.3.2 去泛素化系統(tǒng)
    1.4 DUB3 的研究進(jìn)展
        1.4.1 DUB3 的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 DUB3 的功能
        1.4.3 DUB3 與癌癥
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與試驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 腸癌組織樣品
        2.1.2 細(xì)胞系、質(zhì)粒及病毒
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 質(zhì)粒提取
        2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.4 慢病毒包裝
        2.2.5 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建
        2.2.6 CRISPR/Cas9 敲除細(xì)胞系構(gòu)建
        2.2.7 總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及定量
        2.2.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.9 免疫印跡實(shí)驗(yàn)Western Blot
        2.2.10 半衰期實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 免疫熒光實(shí)驗(yàn)IF
        2.2.12 免疫沉淀實(shí)驗(yàn)IP
        2.2.13 泛素化實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.2.1 DUB3 被鑒定為NRF2 最有可能的去泛素化酶
        3.2.2 NRF2和DUB3 在腸癌組織中表達(dá)上調(diào)
        3.2.3 DUB3 穩(wěn)定NRF2 的蛋白水平
        3.2.4 DUB3 促進(jìn)NRF2 的轉(zhuǎn)錄活性
        3.2.5 DUB3、NRF2和KEAP1 一起形成一個(gè)復(fù)合體
        3.2.6 DUB3 降低NRF2的K48 連接的泛素化
        3.2.7 DUB3 通過(guò)上調(diào)NRF2 引起化療耐藥
    3.3 討論與展望
參考文獻(xiàn)
博士期間發(fā)表及待發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3726067