目的:矽肺是因持久、大量吸入游離二氧化硅（Silicon dioxide,SiO₂）粉塵顆粒而導(dǎo)致的以肺部矽結(jié)節(jié)形成,伴有大量膠原沉積等病理表現(xiàn)為顯著特點的全身性疾病。肺巨噬細(xì)胞吞噬SiO₂后釋放致纖維化因子作用于成纖維細(xì)胞,使其過度增殖、遷移致不可逆性肺纖維化。通過上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT/endothelial-mesenchymal transition,EndoMT）而來的肌成纖維細(xì)胞參與了這一病理過程。課題組前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CCCH型鋅指蛋白家族成員-MCPIP1在矽肺EndoMT中扮演了重要角色,ZC3H4作為MCPIP1同家族成員在矽肺間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用不明。此外近年來研究發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞治療肺纖維化具有促進肺實質(zhì)再上皮化、抑制肺部炎癥反應(yīng)、延緩肺纖維化等優(yōu)勢,但關(guān)于其對間質(zhì)轉(zhuǎn)化,尤其是對EndoMT這一病理過程的影響未見報道。因此本研究著重探討在矽肺肺纖維化中ZC3H4對間質(zhì)轉(zhuǎn)化的調(diào)控作用,以及人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（human bone marrow mese... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

SiO2誘導(dǎo)小鼠肺EMT現(xiàn)象（A）天狼猩紅染色檢測SiO2刺激對小鼠肺部膠原沉積的影響，圖中的標(biāo)尺為20μm

東南大學(xué)博士學(xué)位論文48圖3ZC3H4在矽肺肺上皮組織中高表達（A）組織免疫熒光染色檢測肺纖維化組小鼠與對照組小鼠肺組織上皮標(biāo)志物E-cad和靶蛋白ZC3H4的表達和分布。圖中的標(biāo)尺為20μm。（B）組織免疫熒光染色檢測健康捐獻者和矽肺病人肺組織中上皮標(biāo)志物E-cad和靶蛋白ZC3H4的表達和分布。圖中的標(biāo)尺為20μm。1.3.4SiO2促進上皮細(xì)胞中ZC3H4的表達升高為了進一步驗證體內(nèi)試驗的結(jié)果，我們在體外實驗中檢測SiO2對肺上皮細(xì)胞ZC3H4表

第一章ZC3H4參與矽肺上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用機制探索49達的影響，結(jié)果如圖4A-B所示，SiO2刺激下，上皮細(xì)胞中ZC3H4表達升高。為了探究ZC3H4的調(diào)控效應(yīng)，利用CRISPR/Cas9技術(shù)對ZC3H4的表達進行調(diào)控，WesternBlot結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染ZC3H4NIC質(zhì)粒后肺上皮細(xì)胞MLE12中的ZC3H4被特異性地敲除（圖4C-D）。圖4SiO2促進上皮細(xì)胞中ZC3H4的表達升高（A）Westernblot檢測SiO2對肺上皮細(xì)胞MLE-12中ZC3H4表達的影響。（B）統(tǒng)計學(xué)結(jié)果。n=5，和對照組0小時相比，*P<0.05。（C）Westernblot檢測在MLE-12中用ZC3H4NIC質(zhì)粒敲除蛋白ZC3H4的效率。（D）統(tǒng)計學(xué)結(jié)果。n=5，和Con-NIC組相比，*P<0.05。1.3.5ZC3H4調(diào)控SiO2誘導(dǎo)的EMT為了驗證ZC3H4對EMT的影響，在上皮細(xì)胞中轉(zhuǎn)染ZC3H4NIC質(zhì)粒后，WesternBlot結(jié)果顯示，敲除ZC3H4能顯著抑制SiO2誘導(dǎo)的E-cad的下調(diào)，及間質(zhì)蛋白COL1、COL3和α-SMA表達的升高，提示ZC3H4調(diào)控EMT（圖5A-B）。細(xì)胞免疫熒光實驗也進一步驗證了這一現(xiàn)象（圖5C）。由于上皮細(xì)胞在發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)化時伴有細(xì)胞骨架重排，因此EMT過程中可同時伴隨細(xì)胞形態(tài)的變化，如圖所示，SiO2刺激同時引起上皮細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞變?yōu)殚L梭形，扁平形，類似于間質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài)，而敲除ZC3H4部分抑制細(xì)胞形態(tài)變化。

【參考文獻】：
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