背景鼻咽癌在中國是發(fā)病率僅次于甲狀腺癌的頭頸部惡性腫瘤,主要高發(fā)于中國華南以及東南亞等地區(qū)。放射治療是鼻咽癌的主要治療手段及根治性治療的重要組成部分。目前,鼻咽癌已取得較理想的生存預(yù)后,但臨床上仍有超過五分之一的鼻咽癌患者經(jīng)過規(guī)范治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。放射抗拒被認(rèn)為是鼻咽癌治療后失敗的主要原因,但目前放射抗拒的具體機(jī)制尚未十分明確。越來越多研究表明,腫瘤出現(xiàn)放射抗拒可能與腫瘤干細(xì)胞（Cancer stem cells,CSCs）有關(guān)。CSCs是一組極少數(shù)的增殖性失控、能夠自我更新、多向分化以及具有干細(xì)胞特性的腫瘤細(xì)胞,它們對放射治療和其他腫瘤治療方式存在抗拒性。以往有學(xué)者發(fā)現(xiàn),通過分次照射的方法獲得的放射抗拒食管癌細(xì)胞顯示出CSC特性及高水平端粒酶活性。端粒酶是一種核糖核蛋白復(fù)合酶,參與了大約90%人類腫瘤的端粒維持機(jī)制。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）是維持端粒酶活性的必要催化亞基,表達(dá)水平與端粒酶活性相一致。hTERT與端粒酶對于維持CSCs的生物學(xué)特性至關(guān)重要,也被認(rèn)為參與調(diào)控腫瘤放射敏感性。我們前期... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：148 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＣＮＥ－２Ｒ細(xì)胞具有明顯的放射抗拒性

沉默ｈＴＥＲＴ通過抑制腫瘤干細(xì)胞樣特性增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞株ＣＮＥ－２Ｒ放射敏感性的機(jī)制研宂?２０１６級博土？學(xué)位論文??ＬＲＣｓ可以反映ＣＳＣｓ的存在［４６］。因此，我們通過免疫細(xì)胞化學(xué)檢測ＬＲＣｓ比??例進(jìn)－－步驗(yàn)證ＣＮＥ－２Ｒ細(xì)胞的ＣＳＣ樣特性，結(jié)果顯示ＣＮＥ－２Ｒ與ＣＮＥ－２細(xì)胞??在加入ＢｒｄＵ前均無陽性細(xì)胞，加入ＢｒｄＵ后第７天幾乎１００％陽性，撤掉ＢｒｃｉＵ??后第１４天可見少數(shù)陽性細(xì)胞，即為ＬＲＣｓ?（圖１－２Ｃ）。兩組細(xì)胞的ＬＲＣｓ比??例為（３．?１０±０．?６３％）?ｖｓ?（０？?４０±０．?３５％），戶＜０．?００１。??Ａ?〇?＊＊＊?Ｂ?ＣＮＥ－２Ｒ?ＣＮＥ－２??§?Ｈ?□?ＣＮＥ－２Ｒ?ｈＴＥＲＴ?ＩｍＩ?１２７ｋｉ）ａ??％?Ｉ?■?ＣＮＥ－２?￣?＾??２?６－國?ＣＤ１３３?ｌ２０ｋＤａ??２ａ????ｃｊ?Ｉ?＊＊?★★★?＊＊?ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ?？丨■丨著｜?９２ｋＤａ??Ｚ?４－?■?丄?工?＊＊＊?＊?丄?一??＾?螽?Ｔ?Ｉ?Ｏｃｔ４?丨＿?４５ｋＤａ??ｉ?２－?Ｉ?１?１＊１?ｎ?Ｂｍｉｌ?ＪＢＩ?１?４１，４３ｋｌ）ａ??１?Ｓｉ?Ｉ?＿?｜垂，Ｎａｎｏｇ４２ｋＤａ??２?〇ＩＵＢ?Ｌｌ＿?Ｕ■疆■?Ｌ｝邏?ｓ〇ｘ２Ｍｉｌ３５ｋＤａ??ＣＡＰＤＩＩ?＾Ｂｇｊ＾?３７ｋＤａ??Ｃ?Ｎｏ?ＢｒｄＵ?ＢｒｄＵ?７ｄ?ＢｒｄＵ?ｗａｓｈｏｕｔ?１４ｄ??ｉ?－?０／－?■?？?＃?Ｉ?？?％?＾?峰??，，ｒ?ｉ?二，？？免?％?？專、＾?令?＼?－?９??ＣＮＥ－２Ｒ?＾??＊?ｔｆ?ｉ?？?９?Ａ＇?￣?＊?’?搴

?ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ?ｉｎ?ＣＮＥ－２Ｒ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｈｉｇｈｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｉｎ??ＣＮＥ－２?ｃｅｌｌｓ?（２０〇ｘ；?Ｐ＜?０．００１）．?Ｂｌａｃｋ?ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ＬＲＣｓ．??４．?３?ＣＮＥ－２Ｒ細(xì)胞的ＣＤ１３３陽性比例高于ＣＮＥ－２細(xì)胞??我們通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步檢測ＣＮＥ－２Ｒ和ＣＮＥ－２細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)志物??ＣＤ１３３蛋白表達(dá)情況，以備下一步分選出ＣＳＣｓ。結(jié)果顯示，ＣＮＥ－２Ｒ細(xì)胞的??ＣＤ１３３表達(dá)率顯著高于ＣＮＥ－２細(xì)胞（圖１－３Ａ），兩組細(xì)胞ＣＤ１３３表達(dá)率分別??為（２．?４９±０．?５６％）?ｖｓ?（０．?７６±０．?２５％），／Ｍ）．?００８?（圖?１－３Ｂ）。??接著，我們通過免疫磁珠分選術(shù)獲得ＣＮＥ－２Ｒ－ＣＤ１３３＋與ＣＮＥ－２Ｒ－ＣＤ１３３－??細(xì)胞，由于分選得到ＣＮＥ－２Ｒ－ＣＤ１３３＋細(xì)胞數(shù)過少（約為３Ｘ?１０１），達(dá)不到ＦＣＭ??所需細(xì)胞數(shù)的要求，因此我們采用熒光定量ＰＣＲ大致評估分選效果。結(jié)果??顯示ＣＮＥ－２Ｒ－ＣＤ１３３＋細(xì)胞ＣＤ１３３基因ｍＲＮＡ表達(dá)水平顯著高于ＣＮＥ－２Ｒ－ＣＤ１３３－??及?ＣＮＥ－２Ｒ?細(xì)胞（圖?１－３Ｃ）。??Ａ?ＩｇＧｌ－ＰＥ?ＣＤ１３３－ＰＥ?Ｂ?４??＂＂?ｆ〇ｌ?Ｑ２?〇２?ｎ?＾?１??〇．〇〇％?（ＭＭＩ％?０．０（１％?？．００％?ｔ?１??ＫＶ?ＵＫ＞?３＊１?Ｉ??????？?ｊ??ＣＮＥ－２Ｒ?Ａ?｜?１??？?ｆ?“■?‘?＃?ｒ?§?＾??ｗ��？２％????ａ－Ｗ／．?＾＊４１％?．Ｖ５９＊／．?＾?ＣＮＥ－２Ｒ?ＣＮＥ－２??＾?＾?


本文編號：3579317