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沉默hTERT通過抑制腫瘤干細(xì)胞樣特性增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2R放射敏感性的機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2022-01-09 19:35
  背景鼻咽癌在中國是發(fā)病率僅次于甲狀腺癌的頭頸部惡性腫瘤,主要高發(fā)于中國華南以及東南亞等地區(qū)。放射治療是鼻咽癌的主要治療手段及根治性治療的重要組成部分。目前,鼻咽癌已取得較理想的生存預(yù)后,但臨床上仍有超過五分之一的鼻咽癌患者經(jīng)過規(guī)范治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。放射抗拒被認(rèn)為是鼻咽癌治療后失敗的主要原因,但目前放射抗拒的具體機(jī)制尚未十分明確。越來越多研究表明,腫瘤出現(xiàn)放射抗拒可能與腫瘤干細(xì)胞(Cancer stem cells,CSCs)有關(guān)。CSCs是一組極少數(shù)的增殖性失控、能夠自我更新、多向分化以及具有干細(xì)胞特性的腫瘤細(xì)胞,它們對放射治療和其他腫瘤治療方式存在抗拒性。以往有學(xué)者發(fā)現(xiàn),通過分次照射的方法獲得的放射抗拒食管癌細(xì)胞顯示出CSC特性及高水平端粒酶活性。端粒酶是一種核糖核蛋白復(fù)合酶,參與了大約90%人類腫瘤的端粒維持機(jī)制。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是維持端粒酶活性的必要催化亞基,表達(dá)水平與端粒酶活性相一致。hTERT與端粒酶對于維持CSCs的生物學(xué)特性至關(guān)重要,也被認(rèn)為參與調(diào)控腫瘤放射敏感性。我們前期... 

【文章來源】:廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】:148 頁

【學(xué)位級別】:博士

【部分圖文】:

沉默hTERT通過抑制腫瘤干細(xì)胞樣特性增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2R放射敏感性的機(jī)制研究


圖1-1?CNE-2R細(xì)胞具有明顯的放射抗拒性

特性圖,細(xì)胞,特性,放射敏感性


沉默hTERT通過抑制腫瘤干細(xì)胞樣特性增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2R放射敏感性的機(jī)制研宂?2016級博土?學(xué)位論文??LRCs可以反映CSCs的存在[46]。因此,我們通過免疫細(xì)胞化學(xué)檢測LRCs比??例進(jìn)--步驗(yàn)證CNE-2R細(xì)胞的CSC樣特性,結(jié)果顯示CNE-2R與CNE-2細(xì)胞??在加入BrdU前均無陽性細(xì)胞,加入BrdU后第7天幾乎100%陽性,撤掉BrciU??后第14天可見少數(shù)陽性細(xì)胞,即為LRCs?(圖1-2C)。兩組細(xì)胞的LRCs比??例為(3.?10±0.?63%)?vs?(0??40±0.?35%),戶<0.?001。??A?〇?***?B?CNE-2R?CNE-2??§?H?□?CNE-2R?hTERT?ImI?127ki)a??%?I?■?CNE-2? ̄?^??2?6-國?CD133?l20kDa??2a????cj?I?**?★★★?**?p-catenin??丨■丨著|?92kDa??Z?4-?■?丄?工?***?*?丄?一??^?螽?T?I?Oct4?丨_?45kDa??i?2-?I?1?1*1?n?Bmil?JBI?1?41,43kl)a??1?Si?I?_?|垂,Nanog42kDa??2?〇IUB?Ll_?U■疆■?L}邏?s〇x2Mil35kDa??CAPDII?^Bgj^?37kDa??C?No?BrdU?BrdU?7d?BrdU?washout?14d??i?-?0/-?■???#?I???%?^?峰??,,r?i?二,??免?%??專、^?令?\?-?9??CNE-2R?^??*?tf?i???9?A'? ̄?*?’?搴

細(xì)胞,分選


?proportion?in?CNE-2R?cells?was?higher?than?that?in??CNE-2?cells?(20〇x;?P<?0.001).?Black?arrows?indicated?LRCs.??4.?3?CNE-2R細(xì)胞的CD133陽性比例高于CNE-2細(xì)胞??我們通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步檢測CNE-2R和CNE-2細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)志物??CD133蛋白表達(dá)情況,以備下一步分選出CSCs。結(jié)果顯示,CNE-2R細(xì)胞的??CD133表達(dá)率顯著高于CNE-2細(xì)胞(圖1-3A),兩組細(xì)胞CD133表達(dá)率分別??為(2.?49±0.?56%)?vs?(0.?76±0.?25%),/M).?008?(圖?1-3B)。??接著,我們通過免疫磁珠分選術(shù)獲得CNE-2R-CD133+與CNE-2R-CD133-??細(xì)胞,由于分選得到CNE-2R-CD133+細(xì)胞數(shù)過少(約為3X?101),達(dá)不到FCM??所需細(xì)胞數(shù)的要求,因此我們采用熒光定量PCR大致評估分選效果。結(jié)果??顯示CNE-2R-CD133+細(xì)胞CD133基因mRNA表達(dá)水平顯著高于CNE-2R-CD133-??及?CNE-2R?細(xì)胞(圖?1-3C)。??A?IgGl-PE?CD133-PE?B?4??""?f〇l?Q2?〇2?n?^?1??〇.〇〇%?(MMI%?0.0(1%??.00%?t?1??KV?UK>?3*1?I????????j??CNE-2R?A?|?1????f?“■?‘?#?r?§?^??w?2%????a-W/.?^*41%?.V59*/.?^?CNE-2R?CNE-2??^?^?


本文編號:3579317

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