發(fā)布時(shí)間：2017-05-07 13:13

  本文關(guān)鍵詞：Notch1在云南宣威女性肺癌中的表達(dá)及作用機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：結(jié)合臨床及體外實(shí)驗(yàn)初步探討Notchl在宣威女性肺癌中的表達(dá)水平、生物學(xué)功能及分子作用機(jī)制。方法：1.Notchl在宣威女性肺癌患者中的表達(dá)及臨床意義研究：在通過免疫組織化學(xué)方法比較女性肺癌(其中宣威地區(qū)54例、非宣威地區(qū)36例)及肺良性病變組織(其中宣威地區(qū)15例,非宣威地區(qū)13例)中Notch1表達(dá)的基礎(chǔ)上,重點(diǎn)研究54例宣威女性肺癌患者的癌組織及遠(yuǎn)端正常肺組織樣本,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)上述樣本中的Notch1表達(dá),并結(jié)合患者的臨床資料做Kaplan-Meier單因素生存分析和Cox多因素回歸分析。2.抑制Notch1基因表達(dá)對(duì)宣威女性肺癌細(xì)胞XWLC-05生物學(xué)特性的影響及作用機(jī)制研究：通過脂質(zhì)體將siNotchl轉(zhuǎn)染入宣威女性肺癌細(xì)胞系XWLC-05,利用qPCR及Western-blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證XWLC-05細(xì)胞中Notchl基因的抑制效果；通過MTT實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、透射電鏡、流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)和測(cè)試caspase-3活性等實(shí)驗(yàn),來研究Notch1基因表達(dá)抑制對(duì)XWLC-05細(xì)胞的增殖、侵襲、形態(tài)、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和caspase-3活性等指標(biāo)的影響。同時(shí)構(gòu)建Notch1基因表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP-Notchl,通過"Rescue功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)”驗(yàn)證siNotchl干擾的特異性,以初步探討Notchl基因的分子作用機(jī)制。3.Notch1在宣威女性肺癌原發(fā)灶及腦轉(zhuǎn)移瘤組織中的表達(dá)及臨床意義研究先后采集20位宣威女性肺腺癌患者的肺癌原發(fā)灶(20例)和腦轉(zhuǎn)移瘤組織(20例)標(biāo)本,甲醛固定,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)肺癌原發(fā)灶和腦轉(zhuǎn)移瘤組織標(biāo)本中的Notch1表達(dá)。結(jié)果：1.宣威女性肺癌患者中Notch1的表達(dá)及臨床意義研究：1) Notch1蛋白在女性肺癌組織中的表達(dá)顯著高于在肺良性病變組織中的表達(dá)(P0.05);Notch1在宣威和非宣威地區(qū)女性肺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為70.37%和69.44%,兩者比較無顯著性差異(P0.05)。2)宣威女性肺癌患者腫瘤組織及遠(yuǎn)端正常肺組織免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示,Notch1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),在肺癌和遠(yuǎn)端正常肺組織中的陽性表達(dá)率分別為70.37%(38/54)和25.9%(14/54),兩者比較有顯著性差異(P=0.000)；Notch1蛋白在臨床不同分期(P=0.000)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移(P=0.007)及腫瘤分化程度不同(P=0.000)的患者中表達(dá)有顯著性差異；Kaplan-Meier單因素生存分析顯示：Notch1蛋白陽性和陰性表達(dá)組的中位生存期分別為27個(gè)月和38個(gè)月,兩者比較有顯著性差異(P=0.041),無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的中位生存期長(zhǎng)于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(P=0.026),早期患者的中位生存期長(zhǎng)于進(jìn)展期患者(P=0.000)；多因素Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型顯示：宣威女性肺癌預(yù)后判斷的獨(dú)立影響因素為病理分期。2.靶向抑制Notch1基因表達(dá)對(duì)宣威女性肺癌細(xì)胞XWLC-05生物學(xué)特性的影響及作用機(jī)制研究：siNotch1可有效抑制XWLC-05細(xì)胞中Notch1基因的表達(dá),siNotch1轉(zhuǎn)染XWLC-05細(xì)胞后,與對(duì)照組相比,siNotch1轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖、侵襲能力也明顯減低(P0.01)。電鏡顯示細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)學(xué)改變,流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示Notch1基因受抑制后細(xì)胞的早期凋亡率明顯高于對(duì)照組細(xì)胞(P0.01),并且出現(xiàn)G0/G1期細(xì)胞周期阻滯；同時(shí),與對(duì)照組相比,細(xì)胞中caspase-3的活性明顯升高(P0.05)。轉(zhuǎn)染表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP-Notch1后有效逆轉(zhuǎn)了siNotch1對(duì)XWLC-05細(xì)胞以上生物學(xué)功能的影響。RNA功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)(rescue control)排除了siNotch1中的脫靶效應(yīng),反向驗(yàn)證了Notch1基因表達(dá)抑制對(duì)宣威女性肺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。3. Notchl在宣威女性肺癌患者原發(fā)灶及腦轉(zhuǎn)移瘤組織中的表達(dá)差異及臨床意義研究：Notchl蛋白陽性染色為棕黃色顆粒,主要定位于細(xì)胞質(zhì),在肺癌原發(fā)灶組織中的陽性表達(dá)率為65%(13/20)；在肺癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織中的陽性表達(dá)率為85%(17/20),兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。初步推測(cè),Notchl在宣威女性肺腺癌腦轉(zhuǎn)移過程中可能起到部分作用。結(jié)論：1.宣威女性肺癌組織中存在Notchl基因表達(dá)異常升高。2. Notchl的表達(dá)水平結(jié)合臨床分期與宣威女性肺癌患者的病情評(píng)估及預(yù)后判斷有一定的關(guān)系。3. Notchl可能通過提高細(xì)胞的增殖能力及抑制caspase-3依賴的凋亡途徑來促進(jìn)宣威女性肺癌的進(jìn)展。4. Notch1在宣威女性肺腺癌腦轉(zhuǎn)移過程中可能起到部分作用。
【關(guān)鍵詞】：宣威 女性 肺癌 Notch1
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 英文縮略語注釋7-9
• 研究背景及立題依據(jù)9-29
• 參考文獻(xiàn)22-29
• 全文中文摘要29-32
• 全文英文摘要32-36
• 第一部分：云南宣威女性肺癌患者中的Notch1表達(dá)及臨床意義研究36-59
• 中文摘要36-38
• 英文摘要38-40
• 前言40-42
• 技術(shù)路線42-43
• 材料與方法43-48
• 結(jié)果48-53
• 討論53-56
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 第二部分：抑制Notch1基因表達(dá)對(duì)宣威女性肺癌細(xì)胞XWLC-05生物學(xué)特性的影響及作用機(jī)制研究59-104
• 中文摘要59-60
• 英文摘要60-62
• 前言62-63
• 技術(shù)路線63-64
• 實(shí)驗(yàn)材料64-69
• 實(shí)驗(yàn)方法69-83
• 結(jié)果83-96
• 討論96-101
• 參考文獻(xiàn)101-104
• 第三部分：宣威女性肺癌原發(fā)灶及腦轉(zhuǎn)移瘤中的Notch1表達(dá)及臨床意義研究104-122
• 中文摘要104-105
• 英文摘要105-106
• 背果106-108
• 前言108-109
• 技術(shù)路線109-110
• 材料與方法110-114
• 結(jié)果114-115
• 討論115-117
• 參考文獻(xiàn)117-122
• 全文總結(jié)122-124
• 研究的創(chuàng)新性和特色124-125
• 綜述125-135
• 參考文獻(xiàn)131-135
• 附錄135-150
• 攻讀博士期間發(fā)表文章及主持和參與的課題150-151
• 致謝151

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：349920