發(fā)布時間：2017-05-07 13:13

  本文關鍵詞：Notch1在云南宣威女性肺癌中的表達及作用機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：結合臨床及體外實驗初步探討Notchl在宣威女性肺癌中的表達水平、生物學功能及分子作用機制。方法：1.Notchl在宣威女性肺癌患者中的表達及臨床意義研究：在通過免疫組織化學方法比較女性肺癌(其中宣威地區(qū)54例、非宣威地區(qū)36例)及肺良性病變組織(其中宣威地區(qū)15例,非宣威地區(qū)13例)中Notch1表達的基礎上,重點研究54例宣威女性肺癌患者的癌組織及遠端正常肺組織樣本,應用免疫組織化學技術檢測上述樣本中的Notch1表達,并結合患者的臨床資料做Kaplan-Meier單因素生存分析和Cox多因素回歸分析。2.抑制Notch1基因表達對宣威女性肺癌細胞XWLC-05生物學特性的影響及作用機制研究：通過脂質體將siNotchl轉染入宣威女性肺癌細胞系XWLC-05,利用qPCR及Western-blot實驗驗證XWLC-05細胞中Notchl基因的抑制效果；通過MTT實驗、Transwell實驗、透射電鏡、流式細胞術實驗和測試caspase-3活性等實驗,來研究Notch1基因表達抑制對XWLC-05細胞的增殖、侵襲、形態(tài)、細胞周期、細胞凋亡和caspase-3活性等指標的影響。同時構建Notch1基因表達質粒pIRES2-EGFP-Notchl,通過"Rescue功能回復實驗”驗證siNotchl干擾的特異性,以初步探討Notchl基因的分子作用機制。3.Notch1在宣威女性肺癌原發(fā)灶及腦轉移瘤組織中的表達及臨床意義研究先后采集20位宣威女性肺腺癌患者的肺癌原發(fā)灶(20例)和腦轉移瘤組織(20例)標本,甲醛固定,應用免疫組織化學技術檢測肺癌原發(fā)灶和腦轉移瘤組織標本中的Notch1表達。結果：1.宣威女性肺癌患者中Notch1的表達及臨床意義研究：1) Notch1蛋白在女性肺癌組織中的表達顯著高于在肺良性病變組織中的表達(P0.05);Notch1在宣威和非宣威地區(qū)女性肺癌組織中的陽性表達率分別為70.37%和69.44%,兩者比較無顯著性差異(P0.05)。2)宣威女性肺癌患者腫瘤組織及遠端正常肺組織免疫組織化學檢測顯示,Notch1蛋白主要表達于細胞質,在肺癌和遠端正常肺組織中的陽性表達率分別為70.37%(38/54)和25.9%(14/54),兩者比較有顯著性差異(P=0.000)；Notch1蛋白在臨床不同分期(P=0.000)、淋巴結是否轉移(P=0.007)及腫瘤分化程度不同(P=0.000)的患者中表達有顯著性差異；Kaplan-Meier單因素生存分析顯示：Notch1蛋白陽性和陰性表達組的中位生存期分別為27個月和38個月,兩者比較有顯著性差異(P=0.041),無淋巴結轉移患者的中位生存期長于有淋巴結轉移的患者(P=0.026),早期患者的中位生存期長于進展期患者(P=0.000)；多因素Cox風險回歸模型顯示：宣威女性肺癌預后判斷的獨立影響因素為病理分期。2.靶向抑制Notch1基因表達對宣威女性肺癌細胞XWLC-05生物學特性的影響及作用機制研究：siNotch1可有效抑制XWLC-05細胞中Notch1基因的表達,siNotch1轉染XWLC-05細胞后,與對照組相比,siNotch1轉染組細胞的增殖、侵襲能力也明顯減低(P0.01)。電鏡顯示細胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)學改變,流式細胞儀檢測顯示Notch1基因受抑制后細胞的早期凋亡率明顯高于對照組細胞(P0.01),并且出現(xiàn)G0/G1期細胞周期阻滯；同時,與對照組相比,細胞中caspase-3的活性明顯升高(P0.05)。轉染表達質粒pIRES2-EGFP-Notch1后有效逆轉了siNotch1對XWLC-05細胞以上生物學功能的影響。RNA功能回復實驗(rescue control)排除了siNotch1中的脫靶效應,反向驗證了Notch1基因表達抑制對宣威女性肺癌細胞生物學功能的影響。3. Notchl在宣威女性肺癌患者原發(fā)灶及腦轉移瘤組織中的表達差異及臨床意義研究：Notchl蛋白陽性染色為棕黃色顆粒,主要定位于細胞質,在肺癌原發(fā)灶組織中的陽性表達率為65%(13/20)；在肺癌腦轉移瘤組織中的陽性表達率為85%(17/20),兩者之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。初步推測,Notchl在宣威女性肺腺癌腦轉移過程中可能起到部分作用。結論：1.宣威女性肺癌組織中存在Notchl基因表達異常升高。2. Notchl的表達水平結合臨床分期與宣威女性肺癌患者的病情評估及預后判斷有一定的關系。3. Notchl可能通過提高細胞的增殖能力及抑制caspase-3依賴的凋亡途徑來促進宣威女性肺癌的進展。4. Notch1在宣威女性肺腺癌腦轉移過程中可能起到部分作用。
【關鍵詞】：宣威 女性 肺癌 Notch1
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 英文縮略語注釋7-9
• 研究背景及立題依據(jù)9-29
• 參考文獻22-29
• 全文中文摘要29-32
• 全文英文摘要32-36
• 第一部分：云南宣威女性肺癌患者中的Notch1表達及臨床意義研究36-59
• 中文摘要36-38
• 英文摘要38-40
• 前言40-42
• 技術路線42-43
• 材料與方法43-48
• 結果48-53
• 討論53-56
• 參考文獻56-59
• 第二部分：抑制Notch1基因表達對宣威女性肺癌細胞XWLC-05生物學特性的影響及作用機制研究59-104
• 中文摘要59-60
• 英文摘要60-62
• 前言62-63
• 技術路線63-64
• 實驗材料64-69
• 實驗方法69-83
• 結果83-96
• 討論96-101
• 參考文獻101-104
• 第三部分：宣威女性肺癌原發(fā)灶及腦轉移瘤中的Notch1表達及臨床意義研究104-122
• 中文摘要104-105
• 英文摘要105-106
• 背果106-108
• 前言108-109
• 技術路線109-110
• 材料與方法110-114
• 結果114-115
• 討論115-117
• 參考文獻117-122
• 全文總結122-124
• 研究的創(chuàng)新性和特色124-125
• 綜述125-135
• 參考文獻131-135
• 附錄135-150
• 攻讀博士期間發(fā)表文章及主持和參與的課題150-151
• 致謝151

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：349920