腫瘤的持續(xù)生長(zhǎng)依賴于新生血管的生成,腫瘤的血管網(wǎng)絡(luò)已是當(dāng)今腫瘤治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)。微管抑制劑是一類臨床應(yīng)用范圍較廣的抗腫瘤藥物,具有潛在的血管生成抑制作用。MT系列化合物MT189是靶向秋水仙堿位點(diǎn)的新型微管抑制劑,MT189對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用具有廣譜性且對(duì)多藥耐藥細(xì)胞有同等程度的增殖抑制效應(yīng)。MT189通過激活JNK通路,下調(diào)MCL-1蛋白水平,誘導(dǎo)凋亡發(fā)揮其抗腫瘤作用。本課題以已有的研究結(jié)果為基礎(chǔ),進(jìn)一步研究MT189抑制血管新生的作用并深入解析其抑制血管新生的機(jī)制。本研究應(yīng)用多個(gè)體內(nèi)外血管生成模型對(duì)微管抑制劑MT189進(jìn)行了系統(tǒng)的考察,確證其新生血管生成抑制作用。體外增殖抑制實(shí)驗(yàn)表明MT189能夠有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間和濃度依賴性;在非細(xì)胞毒性作用條件下,Transwell及管腔形成實(shí)驗(yàn)闡明MT189對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移與管腔形成兩個(gè)環(huán)節(jié)具有很強(qiáng)的抑制作用;采用大鼠動(dòng)脈環(huán)和雞胚脲囊膜兩個(gè)模型對(duì)MT189半體內(nèi)及體內(nèi)的血管新生抑制作用進(jìn)行評(píng)價(jià)顯示,MT189抑制大鼠動(dòng)脈環(huán)微血管生成,并降低雞胚脲囊膜上的血管密度,且均具有濃度依賴性。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),MT189... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所)上海市

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 引言
    1.1 血管生成
        1.1.1 腫瘤血管生成的方式
        1.1.2 調(diào)控腫瘤血管生成的分子機(jī)制
        1.1.3 調(diào)控腫瘤血管生成的細(xì)胞機(jī)制
        1.1.4 提高靶向腫瘤治療的策略
    1.2 血管生成抑制劑
        1.2.1 直接血管生成抑制劑
        1.2.2 間接血管生成抑制劑
    1.3 微管抑制劑
        1.3.1 微管抑制劑的抗血管生成機(jī)制
        1.3.2 微管抑制劑MT189
    1.4 存在問題與研究意義
    1.5 研究思路與方案
        1.5.1 MT189的新生血管抑制作用
        1.5.2 MT189抑制血管新生的分子機(jī)制
第2章 MT189新生血管生成抑制作用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 藥品與試劑
        2.1.2 耗材與儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 SRB法
        2.2.3 Cell Counting Kit（CCK-8）法
        2.2.4 細(xì)胞遷移試驗(yàn)
        2.2.5 細(xì)胞管腔形成試驗(yàn)
        2.2.6 大鼠動(dòng)脈環(huán)試驗(yàn)
        2.2.7 雞胚脲囊膜血管生成實(shí)驗(yàn)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 MT189對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖抑制作用
        2.3.2 MT189對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖抑制作用的時(shí)效和量效關(guān)系
        2.3.3 MT189抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移
        2.3.4 MT189抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成
        2.3.5 MT189抑制大鼠動(dòng)脈環(huán)微血管生成
        2.3.6 MT189抑制雞胚脲囊膜血管生成
    2.4 討論
第3章 MT189抑制VEGF刺激的血管生成和VEGF的轉(zhuǎn)錄與分泌
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 藥品與試劑
        3.1.2 耗材與儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 SRB法
        3.2.3 細(xì)胞遷移試驗(yàn)
        3.2.4 細(xì)胞管腔形成試驗(yàn)
        3.2.5 熒光定量PCR（Real-time PCR）
        3.2.6 ELISA法測(cè)定VEGF分泌
        3.2.7 Western blot實(shí)驗(yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 MT189抑制VEGF刺激的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖
        3.3.2 MT189抑制VEGF刺激的血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移
        3.3.3 MT189抑制VEGF刺激的血管內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成
        3.3.4 MT189抑制缺氧條件下腫瘤細(xì)胞VEGF的轉(zhuǎn)錄和分泌
        3.3.5 MT189抑制缺氧誘導(dǎo)的HIF-1α蛋白水平
        3.3.6 MT189抑制常氧條件下腫瘤細(xì)胞VEGF的轉(zhuǎn)錄和分泌
        3.3.7 MT189抑制內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的轉(zhuǎn)錄和分泌
        3.3.8 MT189對(duì)VEGF受體及磷酸化水平的影響
    3.4 討論
第4章 MT189增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞間連接的穩(wěn)定性
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 藥品與試劑
        4.1.2 耗材與儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 Western blot實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 免疫熒光共聚焦實(shí)驗(yàn)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 MT189對(duì)HUVEC細(xì)胞骨架蛋白和胞間連接蛋白的影響
        4.3.2 MT189處理導(dǎo)致細(xì)胞骨架微絲發(fā)生重構(gòu)
        4.3.3 MT189引起Vinculin蛋白在細(xì)胞中分布的變化
        4.3.4 MT189對(duì) β-Catenin蛋白的影響
        4.3.5 MT189增強(qiáng)VE-Cadherin與Vinculin及 β-Catenin蛋白的共定位
        4.3.6 MT189對(duì)腫瘤細(xì)胞骨架蛋白和胞間連接蛋白的影響
    4.4 討論
第5章 MT189抑制黏著斑重塑
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 藥品與試劑
        5.1.2 耗材與儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.2.2 Western blot實(shí)驗(yàn)
        5.2.3 免疫熒光共聚焦實(shí)驗(yàn)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 MT189對(duì)FAK和Paxillin蛋白量的影響
        5.3.2 MT189對(duì)Paxillin蛋白分布的影響
        5.3.3 MT189促進(jìn)Vinculin與Paxillin的結(jié)合
        5.3.4 MT189抑制腫瘤細(xì)胞中Src、FAK及Paxillin蛋白的磷酸化
        5.3.5 MT189抑制缺氧誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中Src及FAK蛋白的磷酸化
    5.4 討論
第6章 MT189經(jīng)由JNK-VEGF通路抑制血管新生
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 藥品與試劑
        6.1.2 耗材與儀器
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        6.2.2 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        6.2.3 細(xì)胞管腔形成實(shí)驗(yàn)
        6.2.4 Western blot實(shí)驗(yàn)
        6.2.5 熒光定量PCR
        6.2.6 ELISA法測(cè)定VEGF分泌
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 JNK抑制劑減弱MT189對(duì)HUVEC細(xì)胞遷移抑制作用
        6.3.2 JNK抑制劑逆轉(zhuǎn)MT189對(duì)HUVEC細(xì)胞分泌VEGF的抑制作用
        6.3.3 JNK抑制劑逆轉(zhuǎn)MT189對(duì)腫瘤細(xì)胞分泌VEGF的抑制作用
        6.3.4 SP600125部分逆轉(zhuǎn)MT189引起的JNK、c-Jun、Src及FAK變化
        6.3.5 MT189在缺氧條件下激活JNK通路及轉(zhuǎn)錄因子c-Jun
        6.3.6 MT189在缺氧條件下抑制Src和FAK的磷酸化
        6.3.7 JNK抑制劑減弱MT189對(duì)HUVEC細(xì)胞管腔形成的抑制作用
        6.3.8 JNK抑制劑減弱MT189抑制腫瘤細(xì)胞VEGF轉(zhuǎn)錄作用
        6.3.9 JNK抑制劑部分逆轉(zhuǎn)MT189增加JNK和c-Jun磷酸化的作用
    6.4 討論
第7章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄Ⅰ 作者簡(jiǎn)歷及研究生在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
附錄Ⅱ 發(fā)表論文全文或首頁(yè)
附錄Ⅲ 研究生在學(xué)期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議



本文編號(hào)：3446961