目的:1.篩選能夠抑制Th17細胞分化的小分子化合物;2.探討SZB120抑制Th17細胞分化的機制研究;3.尋找SZB120的直接作用靶點,并驗證其在Th17細胞分化當(dāng)中的功能;4.探討SZB120對IMQ誘導(dǎo)的小鼠類銀屑病模型的治療作用。方法:采用IL-17A-GFP小鼠體外提取naive CD4+細胞進行體外誘導(dǎo)分化,比較AKBA（11-羰基-β-乙酰乳香酸）與SZB120抑制Th17細胞的分化情況。細胞培養(yǎng)72h后,收集細胞,進行胞外染色后用BD Fortessa X20流式細胞儀進行檢測。利用CCK-8檢測小分子化合物抑制HaCaT細胞增殖的影響,細胞貼壁后,小分子處理24h后,每孔加入10 u 1 CCK-8置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)反應(yīng),2h后用酶標(biāo)儀檢測細胞在450nm處測量吸光度。采用Cell Trace Violet燃料檢測Th17細胞增殖,加入0.5μM、5μM SZB120至加入了細胞示蹤染料的naive CD4+T細胞中,72h后上機檢測CD4+IL-17+細胞的比例后同時查看細胞增殖的情況。采用Apoptosis試劑盒檢測SZB120對Th17細胞的影響,Th17 細... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１小分子調(diào)節(jié)ＥＩＦ２Ｓ１［Ｗ］??１．４糖酵解影響Ｔｈ１７分化??靜止的、幼稚的Ｔ細胞具有相對適度的生物合成和能量需求，其通常通過三羧酸??（ＴＣＡ）循環(huán)的葡萄糖氧化和具有低水平糖酵解的脂質(zhì)氧化來滿足

?ＳＺＢ１２０抑制Ｔｈ１７細胞分化及對小鼠類銀屑病糢型的治療機制研究???特征，故在體外細胞篩選中我們采用了人永生化角質(zhì)形成細胞ＨａＣａＴ作為研究對象，??待細胞貼壁后加入了候選小分子化合物ＳＺＢ１２０，作用２４ｈ后在酶標(biāo)儀上查看結(jié)果，可??得知ＳＺＢ１２０對ＨａＣａＴ細胞的增殖具有一定的抑制效果（２ｂ）。圖２ｂ數(shù)據(jù)采用Ｗ法檢??驗，八及０５，不符合正態(tài)分布，用Ｌｅｖｅｎｅ檢驗方差齊性，片０．０７０＞０．?０５，方差齊。??因此將１０ｕＭ、２０ｕＭ、３〇ｙＭ與１?ｕＭ進行Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ單因素方差分析檢驗，??ＳＺＢ１２０的３０ｕＭ較ＤＭＳ０組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（／ＭＬ?００６５）。??ａ?ｂ??〇?９〇ｎ?Ｉ?￣?Ｉ??Ｖ?１８５－?．??、層１ｒ—。丄夢?ｉ卜，??ＨＯ．?■?Ｕｊ?－Ｌ，??ＩＩＩ?Ｉ??＾?＾?＾??圖２?ＳＺＢ１２０抑制Ｔｈ１７分化和ＨａＣａｔ細胞增殖??ａ．?ＡＫＢＡ?（左）和ＳＺＢ１２０?（右）結(jié)構(gòu)式；??ｂ．?ＳＺＢ１２０在３０?ｕ?Ｍ有抑制ＨａＣａｔ？細胞增殖效果。??表５?ＳＺＢ１２０抑制ＨａＣａｔ細胞增殖率比較Ｍｅｄ?ｉ?ｕｍ??濃度（ｕＭ）?ｎ?抑制率（１００％）?Ｐ???１?３?－０．３３?（－３，?１）??１０?３?１１．０?（１０．０，?１１．５）?０．９１９４??２０?３?２３．?７?（２３．０，?２４．５）?０．?１２２５???３０?３?７７．０?（７６．０，?７８．５）?０．?００６５??注：各組均與１?ｕＭ組比較。??２．?３．?２?ＳＺＢ１２０較ＡＫＢＡ有更好的抑制Ｔｈｌ７分化的效

??ＤＭＳＯ?＇?＾?ｒＳｉ?，?ｐ＾ｉ??，?＾－°?１?＾１０－?ｈｒｈ?？？??—Ｉ????＿＞．?■■＊■ｎ１?＿＿?ｉ?■＿＿■，＿■，？?＿＿■＿■■．帽一＿?丨丨，．．?…，?＾ｍ０??Ｏ?．?ＳＺＢ１２０－１｜｜Ｍ?ＳＺＢ１２０－５ｍＭ?Ｅ?－?＾??＜?????５．６６?１．７７?Ｏ?＾５＂?ｍ??５?＊?－?ｌ?〇ｉｌ，．．ｌ?１，１１，１?－Ｕｌ?Ｊ?＾??ＣＤ４?＊１＾－｜—［ｗ－??ＡＫＢＡ?ＳＺＢ１２０??圖３?ＡＫＢＡ與ＳＺＢ１２０抑制Ｔｈ１７細胞分化比較??ａ．中間１－１１號小鼠為ＩＬ－１７Ａ－ＧＦＰ小鼠；??ｂ．各組均與ＤＭＳ０組比較，Ｐ〈０．?０５被認為在統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異。每次實驗至少重復(fù)兩到三??次，＊?Ｐ＜０．?０５：林?Ｐ＜０＿０１；?＊林?ＰＣ０．００１，?ｎｓ：無統(tǒng)計學(xué)意義。??２．?３．?３?ＳＺＢ１２０?促進?ＣＤ４＋／ＩＬ－１７＋細胞凋亡??首先我們用細胞示蹤的紫色標(biāo)記幼稚ＣＤ４＋?Ｔ細胞，在誘導(dǎo)Ｔｈｌ７細胞分化的同時??加上不同濃度的ＳＺＢＩ２０或ＤＭＳ０。如圖４ａ所示，我們發(fā)現(xiàn)ＳＺＢ１２０不會影響低于５ｕ??Ｍ的⑶４＋?Ｔ細胞的增殖。接下來我們想知道ＳＺＢ１２０是否會導(dǎo)致Ｔ細胞死亡，因此我??們使用來自ＩＬ－１７Ａ－ＧＦＰ小鼠的幼稚⑶４＋Ｔ細胞來觀察Ｔｈｌ７細胞分化條件下活細胞的??百分比。但值得注意的是，在我們使用的所有濃度中，即使最小濃度（０．５?ＵＭ）也具??有誘導(dǎo)ＣＤ４＋ＩＬ－１７—細胞凋亡的傾向（圖４ｂ）。這些數(shù)據(jù)表明，ＳＺＢ１２０引起的Ｔｈｌ７分化??減少與其增殖沒有很大關(guān)聯(lián)，至于與其誘導(dǎo)細胞凋亡的潛在

【參考文獻】：
期刊論文
[1]銀屑病中醫(yī)研究概述[J]. 尚俊良,徐佳,王莒生,周冬梅,張旭.  中醫(yī)雜志. 2017(22)
[2]Chemical Abstracts[J].   Medicinal Plant. 2013(02)
[3]Extraction Technology of Ursolic Acid from Ligustrum lucidum Ait.[J]. CHEN Liang* ,XIA Xiao-fen,HOU Ren,MA Mei-gui,MEI Fang-fang,CAI Li,ZHOU Xuan College of Life Sciences,Hubei Normal University,Huangshi,Hubei 435002,China.  Medicinal Plant. 2011(12)
[4]地方政府與中央政府在生態(tài)治理中的博弈分析[J]. 劉子恬.  科技促進發(fā)展. 2011(07)
[5]中國六省市銀屑病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 丁曉嵐,王婷琳,沈佚葳,王曉艷,周城,田珊,劉盈,彭光輝,周俊娥,薛樹旗,王仁利,唐英,孟雪梅,裴廣德,白云花,劉青,李航,張建中.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2010(07)
[6]信息時空[J].   文體用品與科技. 2009(10)
[7]Introduction[J].   中國科技產(chǎn)業(yè). 2005(02)
[8]全國1984年銀屑病流行調(diào)查報告[J]. 全國銀屑病流行調(diào)查組,邵長庚,張國威,包寅德,蔣仲元,韓國柱,顧恒.  皮膚病與性病. 1989(01)



本文編號：3426118