S100A14是EF-手型鈣結(jié)合蛋白家族成員之一,在多種腫瘤中表達異常并與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。TCGA乳腺癌數(shù)據(jù)庫分析表明:S100A14在乳腺癌中存在拷貝數(shù)擴增,在轉(zhuǎn)移性乳腺癌數(shù)據(jù)集中拷貝數(shù)擴增比例高達27%;S100A14拷貝數(shù)擴增與其mRNA表達正相關(guān);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者S100A14表達亦顯著升高。GEO數(shù)據(jù)庫進一步分析表明S100A14高表達的乳腺癌患者無進展生存差。我們進一步通過免疫組化實驗在蛋白水平驗證S100A14在乳腺癌配對組織和淋巴結(jié)中的表達,結(jié)果顯示:S100A14在乳腺癌組織中表達顯著上調(diào),且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)。為了明確S100A14在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用,我們通過一系列功能獲得和缺失實驗進行表型研究。結(jié)果表明:過表達S100A14顯著增強乳腺癌細胞侵襲和遷移能力;敲除S100A14起到相反的作用。過表達S100A14的原位種植轉(zhuǎn)移、實驗性轉(zhuǎn)移結(jié)果均顯示:S100A14促進乳腺癌體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移;而抑制S100A14表達后實驗性肺轉(zhuǎn)移能力和S100A14基因敲除MMTV-PyMT自發(fā)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移能力均顯著降低。進一步研究發(fā)現(xiàn)S100A14促進乳腺癌細胞發(fā)生上皮間質(zhì)... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１本實驗所用質(zhì)粒的圖譜

清和小鼠血清中ＣＸＣＬ３和ＣＸＣＬ５含量的檢測??胞上清和小鼠血清中ＣＸＣＬ３和ＣＸＣＬ５含量的檢測選用的試劑盒，具體操作步驟如下：??３／ＣＸＣＬ５標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：在使用前２ｈ內(nèi)準(zhǔn)備。將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋Ｋ?２５０ｐｇ／ｍＫ?１２５ｐｇ／ｍｌ、６２＿５ｐｇ／ｍｌ、３１．３ｐｇ／ｍｌ、１５．６ｐｇ／ｍｌ標(biāo)記抗小鼠ＣＸＣＬ３／ＣＸＣＬ５抗體工作液：在使用前２ｈ內(nèi)準(zhǔn)記抗小鼠ＣＸＣＬ３／ＣＸＣＬ５加抗體稀釋液９叫１的比例配制工－過氧化酶復(fù)合物（ＡＢＣ）工作液的準(zhǔn)備：在使用前ｌｈ內(nèi)準(zhǔn)氧化酶復(fù)合物（ＡＢＣ）加ＡＢＣ稀釋液９９ｙ的比例配制工的ＡＢＣ應(yīng)預(yù)先在３７°Ｃ中平衡至少３０ｍｉｎ后加入孔內(nèi)。??子水將２５ｘ洗滌液稀釋至ｌｘ。??需酶標(biāo)板數(shù)目，其余包裝好放入冰箱中，其中一空作為空品和稀釋好的待測樣品各１０００依次加入孔中。酶標(biāo)板加上０ｍｉｎ。??

院中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文好的ＡＢＣ工作液按每孔１００４依次加入，酶標(biāo)板加上封板〇??緩沖液洗滌５次，每次浸泡２ｍｉｎ。??９〇４依次加入ＴＭＢ顯色液，３７°Ｃ避光反應(yīng)２５－３０ｍｉｎ。??９〇４依次加入ＴＭＢ終止液，此時顏色由藍色轉(zhuǎn)為黃色。??在４５０ｎｍ波長測定ＯＤ值。??品的濃度和吸光度值繪制曲線（見圖１－３）。??測樣品濃度。??


本文編號：3425622