第一部分Gax在胸主動(dòng)脈瘤組織中的表達(dá)及其對(duì)胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的作用研究目的:探討Gax在胸主動(dòng)脈瘤組織中的表達(dá)水平,以及Gax對(duì)胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的影響方法:收集2016年9月至2017年9月在本院進(jìn)行手術(shù)治療的16例退行性變升主動(dòng)脈瘤患者的胸主動(dòng)脈瘤壁組織,正常對(duì)照組標(biāo)本16例取自同一時(shí)期進(jìn)行冠脈搭橋術(shù)的冠心病患者。通過(guò)Real-time PCR和Western blot方法檢測(cè)Gax在胸主動(dòng)脈瘤壁中膜組織中的mRNA和蛋白表達(dá)水平;應(yīng)用消化貼壁法原代培養(yǎng)正常人胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和胸主動(dòng)脈瘤血管平滑肌細(xì)胞,并通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)α-actin和Gax的表達(dá)水平;應(yīng)用Ad-Gax或Ad-Gax siRNA轉(zhuǎn)染VSMCs,通過(guò)Western blot方法檢測(cè)Gax過(guò)表達(dá)對(duì)有或無(wú)PDGF-BB刺激下VSMCs中Calpoin和SM-MHC 11蛋白表達(dá)的影響;通過(guò)CCK8方法檢測(cè)Gax過(guò)表達(dá)或低表達(dá)對(duì)有或無(wú)PDGF-BB刺激下VSMCs增殖的影響;通過(guò)Transwell方法檢測(cè)Gax過(guò)表達(dá)或低表達(dá)對(duì)有或無(wú)PDGF-BB刺激下VSMCs遷移的影響。結(jié)果:Real-tim... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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Gax蛋白在主動(dòng)脈壁中膜組織中表達(dá)水平的Westernblot檢測(cè)，與對(duì)照組比較，*表示P<0.05

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2016級(jí)博士學(xué)位論文14Westernblot結(jié)果顯示，Gax蛋白在胸主動(dòng)脈瘤壁中膜組織中的表達(dá)水平顯著低于正常胸主動(dòng)脈壁中膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,見(jiàn)圖2。圖2Gax蛋白在主動(dòng)脈壁中膜組織中表達(dá)水平的Westernblot檢測(cè)，與對(duì)照組比較，*表示P<0.05。Figure2TheexpressionlevelofGaxproteininvasculartunicamediafromaorticwalltissuesbyWesternblot.Comparedwiththatincontrolgroup,*indicatedP<0.05.2.2血管平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)消化貼壁法培養(yǎng)主動(dòng)脈中膜組織塊1周后，組織塊邊緣爬出細(xì)胞，源于冠心病患者在行冠脈搭橋手術(shù)過(guò)程中與升主動(dòng)脈橋血管吻合時(shí)打孔取下的正常主動(dòng)脈壁組織的VSMCs細(xì)胞呈梭形，能隱約看到肌絲，并存在細(xì)胞極性；源于手術(shù)切除的升主動(dòng)脈瘤病變組織的VSMCs成不規(guī)則形，細(xì)胞極性弱，見(jiàn)圖3。圖3消化貼壁法原代培養(yǎng)VSMCs，A：正常胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞；B：胸主動(dòng)脈瘤VSMCs。Figure3PrimaryculturedVSMCsbythemethodofenzymedigestionandadherent.A:Normalthoracicaorticsmoothmusclecells.B:VSMCsfromthoracicaorticaneurysmtissues.2.3血管平滑肌細(xì)胞的鑒定α-acitn細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，培養(yǎng)的細(xì)胞顯著表達(dá)α-acitn蛋白（紅色熒光），表明為主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞；從圖4中可見(jiàn)，源于正常胸主動(dòng)脈組織的VSMCs中α-acitn表達(dá)顯著高于源于胸主動(dòng)脈瘤組織的VSMCS，表明胸主動(dòng)脈瘤中的VSMCs發(fā)生由收縮表型向合成表型的轉(zhuǎn)化。AB

細(xì)胞4細(xì)胞免疫熒胞；B：胸主動(dòng)熒光染色方法

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Gax基因調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 鄭輝,薛松.  廣東醫(yī)學(xué). 2010(21)
[2]兔血管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)及生長(zhǎng)特性研究[J]. 鄭輝,薛松,連鋒,黃日太,胡振雷.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(09)



本文編號(hào)：3344672