肝臟作為機(jī)體重要的消化和解毒器官,之前的研究已經(jīng)報(bào)道過量的氟暴露會(huì)引起肝臟細(xì)胞的自噬和凋亡,最終造成肝臟結(jié)構(gòu)和功能的損傷。最近有研究報(bào)道IL-17在自噬和凋亡過程中發(fā)揮重要的作用。然而,IL-17在氟誘導(dǎo)肝損傷中的作用機(jī)制尚不清楚。因此,本論文建立了氟中毒小鼠模型,細(xì)胞模型,IL-17基因敲除小鼠模型,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)、組織染色、電鏡、ELISA、qRT-PCR、western blotting、熒光染色、相關(guān)試劑盒檢測各個(gè)模型中肝臟IL-17及其信號(hào)通路、凋亡、自噬情況,探索IL-17及其信號(hào)通路在氟致小鼠肝臟細(xì)胞自噬和凋亡中的作用機(jī)制。（1）氟中毒模型試驗(yàn)結(jié)果:試驗(yàn)通過0、25、50、100mg/LNaF處理150天,氟中毒模型的建立后發(fā)現(xiàn)氟暴露后PAS染色陽性區(qū)域減小,HE和TEM結(jié)果顯示肝臟形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,ALT和AST含量在血清中增加,結(jié)果表明氟暴露誘導(dǎo)了肝臟結(jié)構(gòu)和功能的損傷。進(jìn)一步運(yùn)用qRT-PCR、免疫組織化學(xué)和免疫印跡結(jié)果表明,氟暴露導(dǎo)致肝臟IL-17信號(hào)通路相關(guān)基因和蛋白表達(dá)含量改變,凋亡相關(guān)基因蛋白Caspase12、p53、Apaf-1、Caspase3和... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：154 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１?ＩＬ－１７信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路??

２．?３?ＮａＦ對(duì)血清中ＡＬＴ和ＡＳＴ水平的影響??血清ＡＬＴ和ＡＳＴ水平用于反映肝損傷情況。如圖２．２所示，小鼠暴露于５０和１００??１＾幾的犯？１５０天后，血清中八１＾和八８丁水平顯著高于對(duì)照組４＜０．０５，卩＜０．０１），??但在２５?ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ組中無顯著變化。??８０ｎ?８０－??｜?．?？?．．??Ｉ?６〇－?４－?ｔ?Ｉ?６〇－?丁??ＪｌｌＬｉｋｌＬ??／?＾?＾?＾?＾?＾?＾??ｃ＇／?／?／?Ｃ〇?／＇?／??圖２．?２?ＮａＦ暴露１５０天后對(duì)雄性小鼠血清中ＡＬＴ和ＡＳＴ水平的影響（ｎ＝６，＊ｐ＜０．?０５，＊＊ｐ＜０．?０１，與??對(duì)照組相比）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＮａＦ?ｏｎ?ｓｅｒｕｍ?ＡＬＴ?ａｎｄ?ＡＳＴ?ｌｅｖｅｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ＮａＦ?ｆｏｒ?１５０?ｄａｙｓ?ｉｎ?ｍａｌｅ?ｍｉｃｅ?（ｎ??＝６，?＊ｐ＜０．０５，?＊＊ｐ＜０．０１，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ）??２．?４?ＮａＦ對(duì)肝臟細(xì)胞凋亡的影響??試驗(yàn)評(píng)估了凋亡相關(guān)基因ｍＲＮＡ和蛋白質(zhì)表達(dá)水平，以確定ＮａＦ對(duì)肝細(xì)胞凋亡的??影響（圖２．３）。如圖２．３?Ａ所示，與對(duì)照組相比，在２５、５０和１００?ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ組中Ｃａｓｐａｓｅ３、??Ｃａｓｐａｓｅｌ２?和?ｐ５３?ｍＲＮＡ?表達(dá)水平顯著升高（ｐ＜０＿０５，ｐ＜０．０１），Ｃｙｔ－ｃ?和?Ａｐａｆ－１?ｍＲＮＡ??表達(dá)水平在５０和１００ｍｇ／ＬＮａＦ組中顯著升高（ｐ＜０．０５，ｐ＜０．０１）。然而，與對(duì)照組相??比，２５、５０和１００１１＾／１＾３？組中８（：１－２的１１１

???／?令?＾?＾?＾?＾?＾?＾??ｃ?／?／?／?＂?／?／Ｖ＇??Ｃ??２．０－１?３－．?１．５－??１１?＾?Ｘ?ｉ｜?：■?ｉ?ｉ．?Ｊ?ｌｌ?？?干??ＨＪｌｌｉ：■■?１１?ｉｌｌ－．?ｉ］ｉｌｌｉ???／》＾?＾?／者＾ｊ者＾??Ｗ?ＣＶ＇Ｖ７＇?Ｗ??Ｄ?１２?３?４??ｐ６２?一?＿＿?－?■一?■一＿??Ｂｅｃｌｉｎ?１?＿■？?＿Ｐ?＿■？?嫺＿｜??ＬＣ３－Ｉ?，??ＬＣ３－ＩＩ?一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?■ＩＰ??圖２．４?ＮａＦ對(duì)肝臟細(xì)胞自噬相關(guān)基因蛋白表達(dá)的影響。（Ｄ）中的１、２、３、４分別為Ｃｏｎｔｒｏｌ、２５??ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ、５０?ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ、１００?ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ?組。（＊ｐ〈０．?０５，＊＊ｐ＜０．?０１，與對(duì)照組相比）。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＮａＦ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｍＲＮＡ?ａｎｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｍｉｃｅ??ｌｉｖｅｒ．?（Ｄ）?１，?２，?３，?４?ａｒｅ?Ｃｏｎｔｒｏｌ，?２５?ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ，?５０?ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ?ａｎｄ?１００?ｍｇ／Ｌ?ＮａＦ?ｇｒｏｕｐｓ，?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ??（＊ｐ＜０．０５，?＊＊ｐ＜０．０１，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ）．??ＭＤＣ染色和自噬相關(guān)基因的ｍＲＮＡ和蛋白質(zhì)表達(dá)水平檢測用于研究ＮａＦ對(duì)肝臟??細(xì)胞自噬的影響（圖２．４）。在圖２．４Ａ中，與對(duì)照組相比，氟暴露后肝臟ＭＤＣ染色出??４４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]氟對(duì)大鼠肝臟氧化應(yīng)激及超微結(jié)構(gòu)的影響[J]. 郭曉英,陳愛莉,孫貴范.  中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2005(04)
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[3]實(shí)驗(yàn)性慢性氟中毒家兔肝、腎動(dòng)態(tài)超微病理學(xué)研究[J]. 曲連東,褚桂芳,滕國麟,張偉木,楊貴軍.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 1994(04)



本文編號(hào)：3267138