膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的顱內(nèi)惡性腫瘤,侵襲能力極強(qiáng),具有發(fā)病率高、復(fù)發(fā)率高、病死率高和治愈率低“三高一低”的特點(diǎn),且預(yù)后很差,術(shù)后中位生存時(shí)間僅14.6個(gè)月。目前,新的藥物及治療手段的發(fā)展并未能被證明可顯著延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間。因此,尋找新的治療靶點(diǎn)和策略是改善膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的重要思路。在此臨床治療現(xiàn)狀下,本研究擬通過(guò)探索新的對(duì)膠質(zhì)瘤惡性行為學(xué)具有重要調(diào)控作用的分子,并通過(guò)離體及在體實(shí)驗(yàn)的方法證明其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性行為學(xué)調(diào)控的具體作用,且進(jìn)一步對(duì)其調(diào)控膠質(zhì)瘤惡性行為學(xué)的可能機(jī)制進(jìn)行初步的探索,為尋找新的膠質(zhì)瘤治療的潛在靶點(diǎn)打下基礎(chǔ)。本研究通過(guò)四個(gè)部分的實(shí)驗(yàn)對(duì)長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long noncoding RNAs,LncRNAs）LncRNA-GAS5參與對(duì)膠質(zhì)瘤惡性行為學(xué)的調(diào)控作用及可能機(jī)制進(jìn)行了證明和闡述:包括收集臨床腫瘤標(biāo)本,檢測(cè)其中GAS5的表達(dá),并與臨床及預(yù)后資料進(jìn)行Cox回歸分析及生存分析以明確GAS5與膠質(zhì)瘤患者臨床預(yù)后的相關(guān)性;在不同的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)GAS5,使用CCK-8、流式細(xì)胞、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移;進(jìn)行原代膠質(zhì)瘤干細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 膠質(zhì)瘤的臨床特點(diǎn)
        1.1.1 膠質(zhì)瘤的流行病學(xué)特征
        1.1.2 膠質(zhì)瘤的病理分型
        1.1.3 膠質(zhì)瘤的分子分類及其臨床意義
        1.1.4 膠質(zhì)瘤的治療現(xiàn)狀和發(fā)展方向
    1.2 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞
        1.2.1 GSCs的來(lái)源
        1.2.2 GSCs的分子標(biāo)記
        1.2.3 GSCs與膠質(zhì)瘤的行為
    1.3 長(zhǎng)鏈非編碼RNA與膠質(zhì)瘤
        1.3.1 LncRNA的分類
        1.3.2 LncRNAs的功能
        1.3.3 LncRNAs與腫瘤
        1.3.4 LncRNAs與膠質(zhì)瘤
        1.3.5 LncRNA-GAS5 在腫瘤中的作用
        1.3.6 LncRNA-GAS5 與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的預(yù)后密切相關(guān)
第二章 LncRNA-GAS5與GBM惡性程度及預(yù)后相關(guān)性分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 臨床樣本及數(shù)據(jù)來(lái)源
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 臨床標(biāo)本的收集及處理
        2.2.2 病例資料的來(lái)源
        2.2.3 RNA的提取、純度檢測(cè)、定量及完整性檢測(cè)
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄PCR
        2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.6 統(tǒng)計(jì)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 LncRNA-GAS5 在高病理級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)較低級(jí)別膠質(zhì)瘤顯著下降
        2.3.2 LncRNA-GAS5 的表達(dá)與患者術(shù)后生存時(shí)間顯著相關(guān)
        2.3.3 LncRNA-GAS5 的表達(dá)及膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)是膠質(zhì)瘤預(yù)后的相關(guān)危險(xiǎn)因素
    2.4 討論
第三章 LncRNA-GAS5 對(duì)膠質(zhì)瘤惡性表型的調(diào)控作用研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 所用細(xì)胞及腦組織
        3.1.2 所用主要試劑
        3.1.3 所用主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 膠質(zhì)瘤細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 提取膠質(zhì)瘤細(xì)胞及膠質(zhì)瘤或正常腦組織的RNA
        3.2.3 反轉(zhuǎn)錄PCR
        3.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量擴(kuò)增PCR
        3.2.5 LncRNA-GAS5 過(guò)表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及細(xì)胞感染
        3.2.6 腫瘤細(xì)胞增殖及凋亡的檢測(cè)
        3.2.7 腫瘤細(xì)胞遷移能力的檢測(cè)
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 GAS5 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)顯著降低,不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞系間其表達(dá)水平不同
        3.3.2 GAS5 過(guò)表達(dá)病毒可有效感染U87、SHG-44、A172 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系
        3.3.3 LncRNA-GAS5 過(guò)表達(dá)可顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力
        3.3.4 LncRNA-GAS5 過(guò)表達(dá)可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡
        3.3.5 過(guò)表達(dá)LncRNA-GAS5 可顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力
        3.3.6 Transwell實(shí)驗(yàn)再次證實(shí)過(guò)表達(dá)GAS5 可顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力
    3.4 討論
第四章 LncRNA-GAS5 在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中的表達(dá)及作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 原代膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定
        4.2.2 LncRNA-GAS5 過(guò)表達(dá)病毒感染膠質(zhì)瘤干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)
        4.2.4 克隆球形成實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)
        4.2.6 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        4.2.7 Edu細(xì)胞增殖檢測(cè)
        4.2.8 統(tǒng)計(jì)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的成功分離及鑒定
        4.3.2 GAS5 過(guò)表達(dá)病毒可有效感染膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,過(guò)表達(dá)GAS5 可降低干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)
        4.3.3 過(guò)表達(dá)LncRNA-GAS5 后可抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的增殖能力
    4.4 討論
第五章 GAS5 對(duì)膠質(zhì)瘤惡性增殖調(diào)控的分子機(jī)制研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 主要成品試劑
        5.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        5.1.3 PCR引物
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 RAP實(shí)驗(yàn)
        5.2.2 報(bào)告基因
        5.2.3 Westernblot
        5.2.4 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)
        5.2.5 熒光實(shí)時(shí)定量PCR(同前)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 RAP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GAS5 通過(guò)與SPACA6 相結(jié)合,保護(hù)SPACA6 不被降解
        5.3.2 SPACA6、Let-7e、miR-125a在膠質(zhì)瘤及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中表達(dá)低于正常膠質(zhì)細(xì)胞
        5.3.3 Let-7e/miR-125a可抑制膠質(zhì)瘤的增殖及遷移能力
        5.3.4 靶基因預(yù)測(cè)Let-7e、miR-125a可能通過(guò)共同下游分子機(jī)制IL-6/IL-6R發(fā)揮抑癌基因的作用
        5.3.5 Let-7e可同時(shí)抑制IL-6和IL-6R的表達(dá),miR-125a可抑制IL-6R的表達(dá)
        5.3.6 報(bào)告基因證實(shí)Let-7e對(duì) IL-6 以及Let-7e和 miR-125a對(duì)其共同下游靶基因IL-6R的表達(dá)的調(diào)控作用
        5.3.7 表型挽救實(shí)驗(yàn)證明GAS5 通過(guò)Let-7e、miR-125 發(fā)揮其抑制膠質(zhì)瘤的作用
        5.3.8 IL-6/IL-6R/STAT3 通路參與了GAS5 作為抑癌基因的分子機(jī)制
    5.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間取得的科研成果
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3180191