目的:胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤,僅2012年,全世界約新發(fā)胃癌989,600例、死亡738,000例,這分別占新發(fā)癌癥病例數(shù)和癌癥死亡人數(shù)的6.7%和8.8%。盡管改進(jìn)了手術(shù)和輔助治療方法,但大約1/3的胃癌患者仍會復(fù)發(fā);且患者一旦復(fù)發(fā),5年總生存率低于25%。因此,鑒定用于診斷和治療該疾病的新標(biāo)志物和治療靶標(biāo)十分重要。我科既往的研究中鑒定出了一系列對胃癌預(yù)后具有預(yù)測能力的分子,本研究所涉及的LBH是其中之一。Limb bud and heart development（LBH）是脊椎動物中高度保守的組織特異性轉(zhuǎn)錄輔助因子,其調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育過程中的多個關(guān)鍵基因的表達(dá)。它位于染色體2p23.1,編碼一個含有105個氨基酸的小核蛋白。除胚胎組織外,LBH還在成人器官中表達(dá),包括脾,腸,腎,腦和外周神經(jīng)系統(tǒng)。在心臟發(fā)育期間異常表達(dá)LBH可導(dǎo)致先天性心臟病,例如部分三體性2p綜合征。Rieger等人在2010年首次發(fā)現(xiàn)了LBH在癌癥中的作用,他們觀察到LBH作為Wnt途徑的靶基因,抑制乳腺上皮分化并促進(jìn)Wnt通路介導(dǎo)的腫瘤形成。Chen等人的研究發(fā)現(xiàn),在肝透明細(xì)胞癌中LBH的過表達(dá)導(dǎo)致了患者... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑與儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 在線數(shù)據(jù)集的下載及預(yù)處理
        2.2.2 在線數(shù)據(jù)集的臨床病理特征和生存分析
        2.2.3 Gene Set Enrichment Analysis(GSEA)分析
        2.2.4 Gene Ontology(GO)和Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomics(KEGG)分析
        2.2.5 Nomogram(列線圖)及其驗證
        2.2.6 臨床病例的入選與排除
        2.2.7 免疫組化染色
        2.2.8 免疫組化評估
        2.2.9 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.10 細(xì)胞計數(shù)
        2.2.11 RNA提取
        2.2.12 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.13 實時定量PCR(qRT-PCR)
        2.2.14 Western Blot檢測蛋白水平
        2.2.15 慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的建立
        2.2.16 MTT法檢測細(xì)胞增殖
        2.2.17 集落形成
        2.2.18 細(xì)胞傷口愈合實驗
        2.2.19 Transwell法檢測細(xì)胞遷移和侵襲
        2.2.20 懸滴細(xì)胞聚集測定
        2.2.21 腹膜轉(zhuǎn)移的小鼠模型
        2.2.22 免疫共沉降技術(shù)檢測蛋白質(zhì)相互結(jié)合
        2.2.23 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)LBH為胃癌的獨立預(yù)后因子
        3.1.1 在TCGA和 GSE29272 隊列中,LBH的表達(dá)水平在胃癌中升高
        3.1.2 在TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 數(shù)據(jù)集中,LBH的上調(diào)與患者不良預(yù)后密切相關(guān)
        3.1.3 LBH表達(dá)與TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 數(shù)據(jù)集中不良的臨床病理特征相關(guān)
        3.1.4 LBH mRNA表達(dá)可作為TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 數(shù)據(jù)集中OS的獨立預(yù)測因子
        3.1.5 列線圖及其驗證
    3.2 胃癌患者中的LBH表達(dá)升高預(yù)示著較差的預(yù)后
        3.2.1 患者的免疫組化分析顯示胃癌組織中LBH表達(dá)升高
        3.2.2 胃癌患者LBH表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性
        3.2.3 高表達(dá)LBH蛋白預(yù)示著GC患者的預(yù)后不良
        3.2.4 LBH蛋白可作為GC患者的獨立預(yù)后標(biāo)志物
    3.3 LBH促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖
        3.3.1 胃癌細(xì)胞系中LBH的 mRNA和蛋白表達(dá)水平
        3.3.2 穩(wěn)定敲減或過表達(dá)LBH細(xì)胞株的建立
        3.3.3 MTT實驗發(fā)現(xiàn)LBH促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖
        3.3.4 集落形成實驗證實LBH可增加胃癌細(xì)胞的集落形成能力
    3.4 LBH促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移
        3.4.1 傷口愈合實驗發(fā)現(xiàn)LBH可以促進(jìn)細(xì)胞的遷移
        3.4.2 Transwell實驗證實LBH可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲
    3.5 LBH抑制了胃癌細(xì)胞的聚集和粘附
        3.5.1 LBH抑制了胃癌細(xì)胞的聚集
        3.5.2 敲減LBH抑制了HGC-27 粘附于HMrSV5 細(xì)胞
    3.6 LBH促進(jìn)胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移
        3.6.1 在線數(shù)據(jù)集提示LBH可能與胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移有關(guān)
        3.6.2 MKN-45P細(xì)胞系中LBH的表達(dá)上調(diào)
        3.6.3 敲減LBH后降低了MKN-45 細(xì)胞系的腹膜轉(zhuǎn)移
        3.6.4 過表達(dá)LBH后增加了BGC-823細(xì)胞的腹膜轉(zhuǎn)移
    3.7 生物信息學(xué)預(yù)測LBH調(diào)控胃癌增殖和轉(zhuǎn)移的可能機制
        3.7.1 基因富集分析(GSEA)
        3.7.2 基因本體論(GO)和京都基因和基因組百科全書(KEGG)分析
    3.8 LBH參與調(diào)節(jié)Integrin/FAK/Akt通路
        3.8.1 在TCGA STAD數(shù)據(jù)集中LBH與整合素家族分子呈正相關(guān)
        3.8.2 Western Blot結(jié)果證實LBH可調(diào)控整合素家族多個分子的表達(dá)
        3.8.3 Western Blot結(jié)果證實LBH參與調(diào)控Integrin/FAK/Akt通路
    3.9 LBH通過調(diào)控c-jun的轉(zhuǎn)錄活性參與調(diào)控NRP1 的表達(dá)
        3.9.1 在線數(shù)據(jù)集顯示NRP1為LBH相關(guān)生物過程中的關(guān)鍵分子
        3.9.2 Western Blot研究證實LBH可以調(diào)控NRP1 的表達(dá)
        3.9.3 LBH作為輔助轉(zhuǎn)錄因子可以通過調(diào)控c-JUN對 NRP-1 的轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控NRP1 的表達(dá)
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Recent advances in the molecular diagnostics of gastric cancer[J]. Mitsuro Kanda,Yasuhiro Kodera.  World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[2]Role of cancer-associated fibroblasts in invasion and metastasis of gastric cancer[J]. Yu Yan,Li-Feng Wang,Rui-Fen Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[3]Role of epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer initiation and progression[J]. Zhao Peng,Chen-Xiao Wang,Er-Hu Fang,Guo-Bin Wang,Qiang Tong.  World Journal of Gastroenterology. 2014(18)
[4]Pathophysiology and biology of peritoneal carcinomatosis[J]. Shigeki Kusamura,Dario Baratti,Nadia Zaffaroni,Raffaella Villa,Barbara Laterza,Maria Rosaria Balestra,Marcello Deraco.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2010(01)



本文編號：3168337