一、研究背景及目的在全球范圍內(nèi),肝細(xì)胞癌（HCC）的發(fā)病率、死亡率居高不下,缺乏特異性腫瘤分子標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)是重要原因之一。基于本課題組前期生物信息學(xué)分析篩選及文獻(xiàn)研究,PRRC2C（proline rich coiled-coil2C）在HCC中與正常肝組織存在表達(dá)差異,目前尚未有在肝細(xì)胞癌中作用的報(bào)道,亦不了解其作用機(jī)制。本課題組提出PRRC2C是HCC的驅(qū)動(dòng)基因并促進(jìn)HCC細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移的假設(shè)。據(jù)此,我們?cè)O(shè)計(jì)了實(shí)驗(yàn)步驟,分別從細(xì)胞水平,動(dòng)物模型上,人肝癌組織芯片三個(gè)層面研究PRRC2C對(duì)肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為的影響、作用機(jī)制及臨床意義,探討其作為腫瘤分子標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)的潛在價(jià)值。二、方法1.驗(yàn)證PRRC2C基因在4種人肝癌細(xì)胞系BEL-7402、BEL-7404、SMMC-7721、Hep G2細(xì)胞中表達(dá)豐度;2.利用慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù),構(gòu)建BEL-7404、SMMC-7721細(xì)胞的PRRC2C基因沉默細(xì)胞模型（實(shí)驗(yàn)組shPRRC2C,對(duì)照組shCtrl）;3.利用Celigo細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)、Annexin V-APC單染法流式細(xì)胞儀檢測(cè)、細(xì)胞克隆形成檢測(cè)、MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＧＶ１Ｉ５載體雙酶Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?ＧＶ１１５?ｖｅｃｔｏｒ?ｄｏｕｂｌ

１．１．３．１?ＰＲＲＣ２Ｃ重組ＲＮＡ干擾載體的鑒定??ＳＩ??１?２?３??圖１－１?ＧＶ１Ｉ５載體雙酶切結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?ＧＶ１１５?ｖｅｃｔｏｒ?ｄｏｕｂｌｅ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??對(duì)ＧＶ１１５空載體用Ａｇｅ?Ｉ和ＥｃｏＲ?ｌ限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切，用１?％的瓊脂??糖凝膠電泳（圖１－１）顯示：沒有酶切的載體質(zhì)粒有兩條條帶（泳道３）（是由??于質(zhì)粒提取試劑盒獲取的質(zhì)粒打兩條完整的雙鏈或帶ｆｊ■一條完整１?丫ｔ鏈和一條斷??裂的單鏈）；經(jīng)過Ａｇｅ?１和ＥｃｏＲｌ雙酶切線性化后的載體質(zhì)粒變成單一的條帶，??說明載體己成功切開（泳道２）。??１?２?３?４?５?６?７?８??圖１－２?ＧＶＵ５重組千擾載體ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?ＧＶ１１５?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ?＼?ｃｃｔｏｒ?ｂ＞?ＰＣＲ??２７??

??ＧＶ１１５重組干擾載體ＰＣＲ驗(yàn)證（圖１－２）顯示：空白對(duì)照組（ｄｄＨ２０）無任??何條帶，證實(shí)鑒定體系中未存在污染（泳道自連對(duì)照組，沒有連入ｓｈＲＮＡ??的空載體克隆ＰＣＲ片段大小為３０７ｂｐ?（泳道２）；隨機(jī)挑選５個(gè)克隆的重組載體??進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，結(jié)果有４個(gè)陽性單克隆，條帶大小為３８１ｂｐ，說明目的序列己??成功克隆入ＧＶ１１５載體中（泳道４－８）。??ｐｓｃｐｓｃ５７７５７的測(cè)序結(jié)果??ＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＡＣＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴ??ＡＡＣ?丁?ＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴ?丁?ＣＧＡＴ?丁丁?ＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡ??ＡＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＡＴＴＡＴＣＴＧＧＣＴＡＴＴＣＴＣＧＡＧＡＡ??ＴＡＧＣＣＡＧＡＴＡＡＴＡＣＡＧＣＣＧＴＴＴＴＴＴＧＡＡＴＴＣＴＣＧＡＣＣＴＣＧＡＧＡＣ??ＡＡＡＴＧＧＣＡＧＴＡＴＴＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＴＣＧＧＡＴＣＣＡＴＴＡＧＧＣＧＧＣＣＧ??ＣＧＴＧＧＡＴＡＡＣＣＧＴＡＴＴＡＣＣＧＣＣＡＴＧＣＡＴＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴ??ＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧ??ＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣ??ＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴ??ＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴ??ＴＡＣＧＧＴＡＡＡ??陽性克隆測(cè)序結(jié)果顯示

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3140936