本文關鍵詞：樹突狀細胞Notch信號在1，25-二羥維生素D3調(diào)節(jié)Th17分化中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的:哮喘是一種具有明顯異質(zhì)性的疾病。根據(jù)哮喘氣道內(nèi)浸潤的炎癥細胞不同,可以把哮喘分成嗜酸細胞性、中性粒細胞性、混合細胞性和寡細胞性哮喘[1]。不同的炎癥細胞表型,提示具有不同的免疫學炎癥機制。過去用“Th1/Th2失衡學說”來闡述其發(fā)病機制,但該學說不能完全解釋嗜酸性細胞炎癥的發(fā)生機制,更不能解釋非嗜酸性細胞性炎癥的機制。隨著更多的輔助性T(Th)細胞的發(fā)現(xiàn),對哮喘發(fā)病的免疫學機制認識也在不斷的深入。近年發(fā)現(xiàn),調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cells,Treg)和Th17細胞都在哮喘發(fā)病中起有重要作用。Treg具有抑制Th分化的作用。Th17則在中性粒細胞炎癥中起有重要作用。但Th細胞分化調(diào)節(jié)的機制仍沒有完全闡明。Treg是具有負反饋調(diào)節(jié)作用的重要T細胞亞群。Treg可以通過抑制其他輔助細胞、輔助細胞效應因子、APC等來完成負反饋作用。大量研究研究顯示,哮喘患者存在明顯的Tregs分化不足和功能低下。也有文獻報道哮喘患者體內(nèi)存在Th17/Treg失衡。所以我們認為Th17/Treg失衡是中性粒細胞性哮喘發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。Th17細胞可以促進中性粒細胞炎癥,在哮喘的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。哮喘患者外周血T細胞中發(fā)現(xiàn)Th17細胞增多,而其主要細胞因子IL-17A可以促進氣道高反應,加重中性粒細胞在氣道中的浸潤,促進氣道的重塑,參與后期氣道和全身炎癥反應,促進其他炎癥因子的生產(chǎn)從而加重哮喘。也有研究發(fā)現(xiàn)在重癥哮喘患者誘導痰及氣管粘膜層IL-17表達顯著上升;氣道對乙酰甲膽堿的高反應性也與誘導痰IL-17A水平呈正相關。Rhonda等研究發(fā)現(xiàn)低劑量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可以加重氣道內(nèi)中性粒細胞的浸潤,促進氣道的高反應性,這與誘導氣道內(nèi)強烈的Th17細胞免疫反應相關。我們前期研究也成功使用低劑量的LPS誘導出以Th17為主的中性粒細胞性哮喘模型。樹突狀細胞(dendritic cells,DCs)是體內(nèi)最強的抗原提呈細胞,DCs將抗原信息遞呈給T細胞時,可以產(chǎn)生免疫反應或免疫耐受兩種不同的結果。在哮喘的發(fā)展中,DCs既可以促進以Th2、Th17細胞為主的氣道變應性炎癥,也可以是調(diào)控以Treg為主的免疫耐受。dcs對t細胞的活化是通過三個信號介導:信號1通過t細胞受體(tcr)與mhc-抗原肽復合物相互作用來傳遞,信號2通過共刺激信號t細胞cd28與dcs上cd80/cd86的相互作用傳遞,這兩個信號共同啟動了t細胞的克隆擴增并分化為效應t細胞,另一個信號-nocth信號通路決定了t細胞發(fā)育命運。研究顯示,dcs過表達delta-like4可以增加il-17的分泌,而中和delta-like4可以抑制體內(nèi)th17細胞活化[2,3]。lps刺激可以上調(diào)delta-like配體,并參與th17細胞的活化[4]。1,25-二羥維生素d3(1α,25-dihydroxyvitamind3,1,25(oh)2d3)是維生素d體內(nèi)的活性形式,具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用,在哮喘中的作用也較多的研究。我們實驗室過去的研究也證實1,25-二羥維生素d3具有調(diào)節(jié)th細胞分化,誘導tregs活化的作用。也有研究發(fā)現(xiàn),1,25-二羥維生素d3可以通過dc途徑間接地抑制th17細胞分化[7]。但是,1,25-二羥維生素d3詳細的作用機制并不清楚,1,25-二羥維生素d3是否能通過dcs的notch信號來調(diào)節(jié)th17細胞的分化目前還沒有報道。因此,本實驗假設1,25-二羥維生素d3可以通過調(diào)節(jié)dcs表達的notch配體delta-like4從而抑制th17細胞分化。本實驗提取ova致敏小鼠脾臟dcs,分別用lps,lps+dex,lps+vitd3處理小鼠脾臟dcs24小時,然后檢測dcs表面mhcⅡ、共刺激分子及各notch配體的表達。然后將處理24小時的dcs與t細胞共培養(yǎng)后,檢測各輔助性t細胞的分化,探討lps及1,25-二羥維生素d3處理的dcs對th17等輔助性t細胞分化的影響。進一步阻斷與th17細胞分化相關的差異表達notch配體,探討1,25-二羥維生素d3對th17細胞分化的機制。研究方法:第一部分:1,25-二羥維生素d3對lps處理的ova致敏的小鼠脾臟dcs表型的影響1.ova致敏小鼠模型的建立在d0、d6給予小鼠腹腔注射0.02%ova-al(oh)3溶液200ul致敏,在第13天后給予1%的ova溶液氣道連續(xù)霧化3天,得到ova致敏模型小鼠。通過肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞比例來判斷模型是否成功。2.1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps等對dcs的影響處死模型小鼠后,無菌分離脾臟,將脾臟細胞處理成無紅細胞的單細胞懸液,用cd11c免疫磁珠分選出樹突狀細胞。用1ul/mlpbs處理的dcs作為對照組,1ug/mllps處理的dcs作為lps組,1ug/mllps+1×10-8mol/l地塞米松處理的dcs作為lps+dex組,1ug/mllps+1×10-8mol/l1,25-二羥維生素d3處理的dcs作為lps+vitd3組。各組細胞在5%co2、37℃無菌環(huán)境中培養(yǎng)24小時后,進行下一步實驗檢測。2.1.流式技術檢測lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs的凋亡各不同處理因素可能影響dcs的活性,造成不同組別間dcs活性的差異。我們用annexinv/pi檢測培養(yǎng)24小時的dcs凋亡程度,以排除后期共培養(yǎng)階段由于dcs活性差異而導致的t細胞分化差異。2.2.lps,lps+dex和lps+vitd3對dcs表面共刺激分子及mhcⅡ表達影響收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs,用流式細胞技術檢測各組dcs細胞表面mhcⅡ和共刺激分子cd80、cd86、cd40的表達。2.3.westernblot檢測lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達的notch各配體蛋白水平收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs,用蛋白裂解液提取各組細胞總蛋白后,用westernblot方法檢測各種處理后dcs中notch配體jagged1,jagged2,delta-like1,delta-like3和delta-like4的蛋白表達。2.4.rt-qpcr檢測lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達的notch各配體mrna水平收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs,提取各組dcs總rna,逆轉錄成cdna,通過特異性擴增后,檢測各種處理后dcs中notch配體jagged1,jagged2,delta-like1,delta-like3和delta-like4的mrna表達。2.5.elisa檢測dcs上清液中細胞因子的表達收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs的上清液,用elisa檢測上清液中il-10、il-23和tgf-β的表達。第二部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟dcs在共培養(yǎng)中對t細胞分化的影響我們在第一部分已經(jīng)檢測到在不同處理因素下dcs處于不同的免疫狀態(tài),而這種不同免疫狀態(tài)的dcs是否會影響t細胞的分化呢?為了進一步檢測各因素處理的dcs對t輔助性細胞分化的影響,我們將不同因素處理后的dcs與t細胞共培養(yǎng)24小時,然后檢測各型輔助t細胞分化比例及分泌的效應因子。無菌分離ova致敏小鼠脾臟,將脾臟處理為無紅細胞的單細胞懸液,用cd4+免疫磁珠分選出t淋巴細胞。收集上述各因素下培養(yǎng)24h的dcs,用1640洗滌dcs,重懸細胞,將dcs和t淋巴細胞按照1:10的比例共培養(yǎng),將共培養(yǎng)細胞放置在5%co2、37℃環(huán)境下培養(yǎng)24h。1.流式細胞技術檢測共培養(yǎng)細胞中各輔助性t細胞比例收集培養(yǎng)24h的細胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個/ml細胞,用pma/lonomycin和bfa/monensin刺激上述細胞6小時后,孵育結合流式抗體cd4+ifn-γ+、cd4+il-4+和cd4+il-17a+,然后用流式儀器檢測其陽性表達比例;收集培養(yǎng)24h的細胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個/ml細胞,直接孵育結合cd4+cd25+foxp3,用流式儀器檢測陽性表達率。2.elisa檢測共培養(yǎng)上清液中細胞因子收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs的上清液,用elisa檢測上清液中il-4、il-17a和ifn-γ的表達。第三部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟dcs表達的detal-like4配體對th17細胞分化的影響我們在前兩部分已經(jīng)檢測了1,25-二羥維生素d3處理對dcs上notch配體表達的影響,同時也檢測了1,25-二羥維生素d3對輔助性t細胞分化的影響,那么1,25-二羥維生素d3能否通過調(diào)節(jié)notch配體表達影響輔助性t細胞的分化呢?本部分實驗將在共培養(yǎng)階段阻斷detal-like4配體后,觀察輔助性t細胞的分化情況。在共培養(yǎng)階段,向培養(yǎng)液中加入5ug/ml的detal-like4阻斷抗體,然后放置在5%co2、37℃環(huán)境下培養(yǎng)24h。1.流式細胞技術檢測共培養(yǎng)細胞中各輔助性t細胞比例收集培養(yǎng)24h的細胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個/ml細胞,用pma/lonomycin和bfa/monensin刺激上述細胞6小時后,孵育結合流式抗體cd4+ifn-γ+、cd4+il-4+和cd4+il-17a+,然后用流式儀器檢測其陽性表達比例;收集培養(yǎng)24h的細胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個/ml細胞,直接孵育結合cd4+cd25+foxp3,用流式儀器檢測陽性表達率。2.elisa檢測共培養(yǎng)上清液中細胞因子收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs的上清液,用elisa檢測上清液中il-17a表達。研究結果:第一部分:1,25-二羥維生素d3對lps處理的ova致敏的小鼠脾臟樹突狀細胞表型的影響1.ova致敏小鼠模型的建立模型組小鼠balf中嗜酸性粒細胞比例高于對照組小鼠(p0.05),細胞計數(shù)也較對照組顯著增多(p0.05),成功復制ova致敏嗜酸粒細胞性哮喘。2.1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps等對dcs的影響2.1.dcs純度及各因素處理的dcs凋亡率用流式細胞技術檢測分離出的模型小鼠脾臟dcs純度,dcs純度大于80%,可以進行下一步實驗。用流式技術檢測經(jīng)各處理后凋亡狀態(tài),各組間的凋亡基本一致,排除由于dcs狀態(tài)差異引起的t細胞分化差異。2.2.lps,lps+dex和lps+vitd3對dcs表面共刺激分子及mhcⅡ表達影響lps刺激的dcs和模型對照組dcs相比cd80、cd86及mhcⅡ分子表達無顯著差異(p0.05),僅cd40表達升高(p0.05),分別為cd80(61.5±11.7%vs58.5±8.4%),cd86(54.4±8%vs65±2.4%),cd40(16.9±3.4%vs31.2.±7.7%),mhcⅡ分子(27.7±8.1%vs27.3±4.3%)。dex或vitd3處理的dcs與lps刺激dcs相比,表達的共刺激分子cd80、cd86、cd40及mhcⅡ分子均無顯著降低(p0.05),分別為cd80(64.4±10.5%,65.4±8.0%vs58.5±8.4%),cd86(56.4±2.3%,58.9±1.6%vs65±2.4%),cd40(21.6±2.3%,22.4±8.9%vs31.1±7.7%)mhcⅡ分子(36.4±4.9%,25.8±7.9%vs27.3±4.3%)。當免疫紊亂時,dcs會高表達mhcⅡ分子和共刺激分子,獲得成熟的表型及功能,這是的dcs可以特異性的與t淋巴細胞結合,導致t淋巴細胞活化成為效應t細胞。結果顯示lps、1,25-二羥維生素d3或者地塞米松處理24小時并不影響dcs共刺激分子及mhcⅡ表達,不影響dcs的成熟狀態(tài)。2.3.westernblot檢測lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達的notch各配體蛋白水平和對照組相比,1,25-二羥維生素d3處理后,jagged1蛋白表達升高(p0.05)。jagged2蛋白表達趨勢基本與jagged1蛋白表達一致。加入lps刺激后detal-like1表達升高(p0.05),加入1,25-二羥維生素d3處理后dcs表達的detal-like1升高(p0.05),加入地塞米松處理的dcs表達detal-like1與lps組比較降低(p0.05)。dcs表達的detal-like3經(jīng)lps刺激未見上升(p0.05),同時加入1,25-二羥維生素d3處理的dcs表達detal-like3無顯著差異(p0.05)。與對照組相比較,lps刺激的dcs表達的detal-like4增加(p0.05),1,25-二羥維生素d3處理后與僅lps刺激相比較dcs表達的detal-like4有下降(p0.05)。這顯示1,25-二羥維生素d3可以調(diào)節(jié)jagged1,jagged2,delta-like1和delta-like4蛋白水平,而地塞米松調(diào)控delta-like1蛋白表達。2.4.rt-qpcr檢測lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達的notch各配體mrna水平lps刺激dcs后,和模型對照組相比,dcs表達的jagged1mrna上升0.3倍(p0.05),jagged2mrna上升0.2倍(p0.05),detal-like1mrna上升3.5倍(p0.01),detal-like3mrna上升0.4倍(p0.01),detal-like4mrna上升6.5倍(p0.01);在lps刺激的同時加入vitd3或者dex后,發(fā)現(xiàn)vitd3組jagged1mrna表達是lps組的1.5倍(p0.05),jagged2mrna是lps組的1.4倍(p0.01),delta-like1mrna是lps組的2.4倍(p0.01),detal-like3mrna是lps組的0.85倍(p0.05),detal-like4mrna是lps組的0.54倍(p0.05);而dex組對jagged1、jagged2、delta-like1、delta-like3無明顯影響,而僅detal-like4mrna是lps組0.8倍(p0.05)。notch信號通路是決定t細胞分化重要信號,結果表明1,25-二羥維生素d3可以調(diào)節(jié)各notch配體mrna表達,地塞米松能下調(diào)delta-like4mrna表達,可能提示1,25-二羥維生素d3可以通過調(diào)節(jié)notch信號從而調(diào)控t細胞分化,這需要進一步實驗證明。2.5.elisa檢測dcs上清液中細胞因子的表達對照組小鼠脾臟dcs低分泌il-10(10.35±1.85)pg/ml,il-23(4.28±0.95)pg/ml,高分泌tgf-β(592.59±60.16)pg/ml,lps處理的dcs高分泌il-10(110.72±9.16)pg/ml、tgf-β(840.44±109.3)pg/ml,對il-23(3.56±1.05)pg/ml分泌未有明顯影響。在lps處理dcs的同時加入地塞米松的dcs低分泌il-10(72.69±5.05)pg/ml和tgf-β(615.54±9.56)pg/ml,對il-23分泌也未有明顯影響;在lps刺激的同時加入1,25-二羥維生素d3處理的dcs低分泌il-10(92.72±15.06)pg/ml,tgf-β(734.44±57.58)pg/ml略有降低、il-23(4.19±1.20)pg/ml分泌未有明顯影響。細胞因子也會影響t細胞向不同t輔助細胞分化,il-23和tgf-β在th17細胞分化的起始、穩(wěn)定和維持階段都發(fā)揮重要作用,il-10在treg分化中也有重要作用。結果表明1,25-二羥維生素d3和地塞米松都可以抑制dcs分泌il-10和tgf-β,對dcs分泌il-23無影響,提示1,25-二羥維生素d3和地塞米松可能通過il-10和tgf-β影響th17與treg分化與功能。第二部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟dcs在共培養(yǎng)中對t細胞分化的影響1.流式細胞技術檢測共培養(yǎng)細胞中各輔助性t細胞比例與對照組相比較,lps處理后的dcs可以刺激t細胞向cd4+ifn-γ+(8.93±2.18vs15.77±2.23)、cd4+il-4+(9.32±2.36vs12.6±1.07)、cd4+il-17a+(9.27±1.35vs16.06±1.83)、cd4+cd25+foxp3(16.4±1.57vs10.93±1.43)分化(p均小于0.05)。1,25-二羥維生素d3處理后,和對照組比較,也可以使t細胞向cd4+ifn-γ+(17.33±2.32vs8.93±2.18)、cd4+il-4+(13.62±1.38vs9.32±2.36)分化(p均小于0.05)。和lps組比較,1,25-二羥維生素d3處理的dcs可以抑制由lps引起的il-17a(7.61±1.72vs16.06±1.83)分化(p0.05)。地塞米松處理dcs與lps組比較,地塞米松可以抑制由lps引起的cd4+ifn-γ+(8.93±1.13vs15.77±2.23)、cd4+il-4+(7.10±0.81vs12.6±1.07)、cd4+il-17a+(8.86±0.96vs16.06±1.83)、cd4+cd25+foxp3(9.46±0.85vs16.4±1.57)分化(p均小于0.05)。這表明地塞米松可以抑制由lps引起各輔助t細胞分化,1,25-二羥維生素d3促進th1細胞和th2細胞分化,抑制th17細胞分化。2.elisa檢測共培養(yǎng)上清液中細胞因子lps處理后與對照組比較細胞上清液中il-17a(12.01±2.2vs4.46±0.11)、il-4(2.5±0.14vs1.66±0.12)分泌升高(p均小于0.05)。1,25-二羥維生素d3處理后與lps組比較,il-17a(3.11±0.25vs12.01±2.2)分泌下降(p0.05),il-4(3.15±0.3vs2.5±0.14)分泌上升(p0.05)。加入地塞米松與lps組比較,il-17a(3.89±0.75vs12.01±2.2)、il-4(1.3±0.24vs2.5±0.14)、ifn-γ(0.56±0.2vs1.88±0.57)分泌均下降(p均小于0.05)。ifn-γ、il-4和il-17a分別是th1、th2和th17細胞的重要效應因子,結果顯示lps可以促進t輔助細胞分泌ifn-γ、il-4和il-17a,進一步發(fā)揮t輔助細胞效應。地塞米松處理抑制細胞分泌其細胞因子,而1,25-二羥維生素d3可以促進il-4分泌,抑制il-17a分泌。第三部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟樹突狀細胞表達的detal-like4配體對th17細胞分化的影響1.流式細胞技術檢測共培養(yǎng)細胞中各輔助性t細胞比例在共培養(yǎng)期間加入detal-like4阻斷抗體后,lps處理后的dcs與對照組相比不能使t細胞向cd4+il-17a+分化(9.4±1.41vs10.03±0.73),同時加入1,25-二羥維生素d3或者地塞米松處理后和lps組比較未有進一步下降(8.96±0.22,9.36±0.67vs9.4±1.41)。與阻斷detal-like4前比較,lps組在阻斷后cd4+il-17a+分化下降(16.06±1.83vs9.4±1.41)(p0.05)。阻斷detal-like4后,treg在對照組、lps組、lps+dex組和lps+vitd3組各組間差異表達與阻斷前各組間差異表達趨勢一致。這表示阻斷detal-like4配體后,抑制了th17分化,但不影響treg分化;阻斷detal-like4配體可以抑制1,25-二羥維生素d3對th17細胞分化調(diào)節(jié)。2.elisa檢測共培養(yǎng)上清液中細胞因子阻斷detal-like4后的共培養(yǎng)上清液il-17a,lps+dex組與對照組、lps組比較有下降(1.50±0.36vs3.08±0.5,3.33±0.17)(p均小于0.05),而lps+vitd3組與對照組、lps組比較無明顯降低(3.47±0.63vs3.08±0.5,3.33±0.17)。這表明阻斷detal-like4后可以抑制1,25-二羥維生素d3對il-17a的調(diào)控,而不能完全抑制地塞米松對il-17a的調(diào)控。研究結論與研究意義1.致敏小鼠分離出的脾臟dcs都處于較成熟狀態(tài),而lps、地塞米松或者1,25-二羥維生素d3處理24小時不影響這種成熟狀態(tài)。相較地塞米松,1,25-二羥維生素d3對notch配體的影響更顯著,這可能提示1,25-二羥維生素d3能顯著通過notch信號通路影響t輔助細胞的分化。2.lps處理dcs可以刺激t細胞向th17與treg分化,地塞米松處理dcs,可以抑制由lps引起輔助細胞分化,但不影響th17/treg平衡。1,25-二羥維生素d3處理dcs,能夠抑制由lps引起的th17細胞分化,而對lps引起的treg細胞分化無明顯影響,有利于th17/treg平衡。3.1,25-二羥維生素d3對th17分化和功能的抑制主要是通過下調(diào)dcs表達的notch配體detal-like4,而阻斷detal-like4不影響treg細胞分化,因此阻斷detal-like4可以有利于th17/treg平衡。地塞米松同時抑制th17細胞和treg細胞分化,但這種調(diào)控不單是通過detal-like4配體。detal-like4在1,25-二羥維生素d3抑制th17分化中發(fā)揮重要作用,進一步表明detal-like4在dcs介導的th17分化中的作用。在體外阻斷detal-like4可以有利于恢復th17/treg平衡,為今后設計阻斷detal-like4的dcs治療哮喘提供新的思路。樹突狀細胞notch信號在1,25-二羥維生素d3調(diào)節(jié)th17
【關鍵詞】：
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-15
• 中文摘要15-23
• 前言23-26
• 第一章 1,25-二羥維生素D3對LPS處理的OVA致敏的小鼠脾臟樹突狀細胞表型的影響26-57
• 1.1 材料與方法26-40
• 1.2 結果40-55
• 1.3 討論55-56
• 1.4 小結56-57
• 第二章 1,25-二羥維生素D3及LPS處理OVA致敏小鼠脾臟樹突狀細胞在共培養(yǎng)中對T細胞分化的影響57-73
• 2.1 材料與方法57-62
• 2.2 結果62-70
• 2.3 討論70-72
• 2.4 小結72-73
• 第三章 1,25-二羥維生素D3及LPS處理OVA致敏小鼠 脾臟樹突狀細胞表達的Detal-like4配體對Th17細胞分化的影響73-87
• 3.1 材料與方法73-78
• 3.2 結果78-83
• 3.3 討論83-85
• 3.4 小結85-87
• 全文結論87-88
• 參考文獻88-93
• 文獻綜述Notch信號通路在CD4+ T輔助細胞分化中的作用93-107
• 參考文獻102-107
• 攻讀博士期間發(fā)表的文章107-108
• 致謝108-109

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱安友;呂合作;張倫軍;胡建國;王鳳超;李柏青;;結核分枝桿菌耐熱抗原激活的人γδT細胞Th2極性分化特征以及T-bet/GATA-3對分化的調(diào)控作用[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年01期

  本文關鍵詞：樹突狀細胞Notch信號在1，25-二羥維生素D3調(diào)節(jié)Th17分化中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：309878