本文關(guān)鍵詞：鼠尾草酸逆轉(zhuǎn)白血病細胞多藥耐藥的體內(nèi)實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鼠尾草酸(carnosic acid, CA)是迷迭香(Rosmarinus)的主要活性化合物之一具有抗氧化、抗炎及抗腫瘤等多種生物學(xué)活性。鼠尾草酸的抗炎和抗腫瘤活性是從動物體內(nèi)和細胞株體外實驗獲得的,至今尚沒有關(guān)于鼠尾草酸的動物毒性試驗數(shù)據(jù)報道。研究目的：基于鼠尾草酸的藥理活性,評估鼠尾草酸在動物體內(nèi)的急性和亞急性(30天)毒性。研究方法：以昆明小鼠為實驗對象進行的急性口服毒性研究遵循OECD指南423條款,在Wistar大鼠進行的30天慢性口服毒性研究基于強化OECD試驗指南407條款。進行急性口服毒性研究的昆明小鼠分為六個試驗組,單次灌胃口服給藥,鼠尾草酸的劑量分別為每公斤體重Omg、3500mg、4500mg、5500mg、7500mg 和 8500mg。亞急性毒性研究以7周齡Wistar大鼠為實驗對象,隨機分為四個試驗組,每日灌胃口服給藥,鼠尾草酸的劑量分別為每公斤體重Omg、150mg、300mg和600mg,連續(xù)給藥最少28天。在不同的時間節(jié)點采集血液樣本進行血液學(xué)和生物化學(xué)指標測定,或處死動物解剖觀察各主要器官形態(tài)和重量的變化,并做病理學(xué)檢查。研究結(jié)果：對小鼠的急性毒性研究顯示口服半數(shù)致死劑量(LD50)為7100mg/kg體重。對所有存活小鼠的病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),心臟和肝臟有輕微的水腫、細胞質(zhì)變性,大劑量組肝臟可見單細胞點狀壞死病灶,心臟可見心肌纖維化和炎癥細胞浸潤。亞急性毒性研究發(fā)現(xiàn),連續(xù)30天給后實驗組動物體重增加幅度稍微減少,但與對照組相比差異沒有達到顯著性水平。隨著實驗進程,飼料消耗量略有減少,但沒有統(tǒng)計學(xué)差異。血生化測定發(fā)現(xiàn)在高、中劑量組血清總蛋白(TP)水平明顯降低,而天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平顯著升高,其他指標四組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。與對照組相比,高劑量組雄性表現(xiàn)出器官與體重比值增加,包括肝、脾和心臟,腎/體重比降低。在中劑量和低劑量組,雌雄也顯示脾的平均體重比增加。同時在高劑量組的組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),心臟有少數(shù)心肌纖維化和少量的心肌纖維有炎性細胞浸潤,肝臟中有單細胞點狀壞死灶,腎臟有些近曲腎小管上皮細胞混濁腫脹及胞漿空泡的病理改變。未發(fā)現(xiàn)低劑量組病理檢查方面與對照組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)論：本研究口服CA的毒性實驗結(jié)果表明,CA具有相對較低的口服毒性但其長時間的使用,特別是在高劑量時應(yīng)非常謹慎。因此,有必要依據(jù)強化0ECD試驗指南407條款,做延長的90天慢性毒性體內(nèi)試驗,以便進一步評估鼠尾草酸臨床應(yīng)用的可行性和安全性。急性白血病的療效已取得顯著提高,但仍面臨嚴峻的挑戰(zhàn)。耐藥的發(fā)生仍是急性白血病治療所面對的嚴重問題,MDR-1/P-gp是介導(dǎo)耐藥發(fā)生的主要因素之一。許多化合物對MDR-1/P-gp的表達具有調(diào)節(jié)作用,但因為其有效劑量存在嚴重的毒性反應(yīng),因此絕大多數(shù)無法臨床實際應(yīng)用。體內(nèi)外的研究均證實鼠尾草酸具有抗腫瘤效應(yīng)。本研究的目的是在建立人類AML的K562/A02/SCID小鼠模型的基礎(chǔ)上,研究CA聯(lián)合阿霉素的抗白血病效應(yīng)。研究目的：建立K562/A02/SCID小鼠模型,探討鼠尾草酸聯(lián)合阿霉素在體內(nèi)是否能夠抑制白血病細胞的增殖。研究方法：4周齡雌性裸鼠接種瘤細胞前三天給予環(huán)磷酰胺處理3天。收集體外培養(yǎng)的處于對數(shù)生長期的K562/A02細胞,調(diào)整細胞濃度為5×107／m1,每只裸鼠接種2個部位(左右腋下),每個部位接種1×107個細胞。注射K562/A02細胞2周后,處死6只小鼠,通過分離外周血細胞和骨髓細胞涂片,并采用RT-PCR檢測MDR-1和BCR-ABL基因表達,來判斷K562/A02/SCID小鼠模型是否建立成功。實驗組給予1%(v/v)CA 2周,繼而給予阿霉素1 mg/kg共三次,每次間隔2天。繼續(xù)飼養(yǎng)4周后,采集血樣、骨髓等進行白血病細胞計數(shù)、MDR-1和BCR-ABL基因和蛋白的檢測以及細胞凋亡分析。研究結(jié)果：注射K562/A02細胞2周后,經(jīng)采集外周血細胞和骨髓細胞涂片,并采用RT-PCR檢測MDR-1和BCR-ABL基因表達,證明K562/A02/SCID小鼠模型建立成功。CA給藥組與和對照組相比血液中白血病細胞分別占20%和32.5%,兩者有顯著差別。白血病細胞的凋亡率,CA聯(lián)合阿霉素組(15.5±1.56)顯著高于單用阿霉素組(11.2±1.80),同樣MDR-1和BCR-ABL基因以及蛋白表達水平,前者顯著低于后者。而肺肝腎和骨髓的病理檢查兩組間沒有顯著差異。但微血管中白血病細胞的數(shù)量在單用阿霉素組較多。兩組小鼠的的存活時間分別為19(10.0-44.2)天和33(29.4-36.6)天,含CA的實驗組小鼠存活期顯著長于不含CA的對照組。研究結(jié)論：CA能夠顯著延長K562/A02小鼠模型的生存期,表明CA是一種很有前途的治療AML的輔助化學(xué)藥物,并能夠一定程度的克服白血病細胞的耐藥性。
【關(guān)鍵詞】：鼠尾草酸 急性毒性 亞急性毒性 動物 鼠尾草酸 K562/A02細胞 白血病小鼠模型 阿霉素 體內(nèi)試驗
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 第一部分：鼠尾草酸的急性和亞急性毒性動物實驗研究5-45
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 符號說明10-12
• 前言12
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-18
• 討論18-20
• 結(jié)論20-22
• 圖表22-36
• 附錄36-40
• 參考文獻40-45
• 第二部分：鼠尾草酸聯(lián)洽阿霉素在K562/A02化CID小鼠體內(nèi)抗白血病作用45-78
• 中文摘要45-47
• 英文摘要47-50
• 符號說明50-51
• 前言51-52
• 材料與方法52-57
• 結(jié)果57-59
• 討論59-60
• 結(jié)論60-62
• 圖表62-73
• 參考文獻73-78
• 致謝78-79
• 英文論文79-103
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文103-105
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況105

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 夏田娟;畢良武;趙振東;;鼠尾草酸的生物活性研究進展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2014年09期

2 陶萍華;文曉林;王雅珍;毛根祥;;鼠尾草酸延緩人胚肺二倍體成纖維2BS細胞衰老的實驗研究[J];營養(yǎng)學(xué)報;2014年03期

3 冀思華;曹圣楷;曾光堯;周應(yīng)軍;;迷迭香二萜酚類成分鼠尾草酸的研究進展[J];中南藥學(xué);2014年08期

4 申婷婷;陳文;趙江;花爾并;王琳;王浩;;迷迭香提取物對高脂膳食喂飼倉鼠Nrf2及下游抗氧化基因的調(diào)控[J];營養(yǎng)學(xué)報;2014年05期

5 王華麗;申婷婷;張澤生;劉昀;王笑儀;王浩;;迷迭香提取物對高脂高膽固醇膳食倉鼠的保護作用研究[J];中國食品添加劑;2015年02期

6 黃杰;王華麗;馬娜;陳純;王軼菲;王浩;;迷迭香提取物對雌性果蠅壽命及抗氧化能力的影響[J];營養(yǎng)學(xué)報;2015年02期

7 申婷婷;馬娜;梁若男;馬茹;薛文琛;王浩;;迷迭香對倉鼠肝臟膽固醇代謝調(diào)控基因表達的影響[J];中國食品學(xué)報;2015年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 覃容欣;山楂抗菌增敏活性物質(zhì)的定向分離及生物學(xué)活性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 相啟森;鼠尾草酸抗氧化、抗腫瘤生物學(xué)功能及其分子機制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

3 李艷紅;熊果酸抗腫瘤及作為小鼠肝癌細胞疫苗佐劑的作用研究[D];石河子大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 趙晴;雞源大腸桿菌中草藥耐藥抑制劑的篩選研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 彭偉;迷迭香精油和抗氧化劑的提取工藝研究[D];華南理工大學(xué);2012年

3 章林;鼠尾草（Salvia Officinalis）對中式香腸抗氧化和食用品質(zhì)的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 鐘海琴;連翹酯苷B對肺炎克雷伯菌外排泵活性的影響[D];寧波大學(xué);2013年

5 廖鵬;酶反應(yīng)體系的敞開式質(zhì)譜快速監(jiān)測研究[D];湖南師范大學(xué);2014年

6 劉永慶;塞來昔布對肝癌HepG2 HepG3細胞的免疫增敏作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

7 陳禹先;鷹嘴豆芽素A對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌外排系統(tǒng)的抑制作用[D];遼寧師范大學(xué);2014年

8 董夏蓮;紅曲色素對脂肪酶活力的影響[D];大連工業(yè)大學(xué);2012年

9 蘇靖;保肝Ⅰ號對大鼠急性及慢性肝損傷的保護作用研究[D];北京理工大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：鼠尾草酸逆轉(zhuǎn)白血病細胞多藥耐藥的體內(nèi)實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：256493