本文關(guān)鍵詞：乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《重慶醫(yī)科大學(xué)》 2015年

RNAi沉默GRP94表達(dá)對(duì)乳腺癌MCF7細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制的研究

樊建軍  

【摘要】：目的乳腺癌是嚴(yán)重威脅婦女身心健康的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在國(guó)內(nèi)呈逐年上升趨勢(shì),雖然近年來(lái)針對(duì)乳腺癌發(fā)病分子水平的研究比較深入,發(fā)現(xiàn)了多種因子及信號(hào)通路參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展,但其發(fā)病機(jī)制仍然不清楚,針對(duì)乳腺癌相關(guān)分子的研究,仍是當(dāng)前研究的重要課題。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94(glucose regulated protein, GRP94),是主要貯存于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的分子伴侶,與HSP90有50%的同源性,參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),同時(shí)也是未折疊蛋白反應(yīng)下游關(guān)鍵分子,研究發(fā)現(xiàn)GRP94在結(jié)腸癌,胰腺癌,食管癌,乳腺癌等多種腫瘤中高表達(dá),且參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,而其相關(guān)機(jī)制的研究是當(dāng)前的熱點(diǎn)之一。本課題在細(xì)胞水平檢測(cè)了GRP94在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá),同時(shí)在乳腺癌MCF7細(xì)胞中采用RNAi技術(shù)靶向下調(diào)GRP94表達(dá),觀察沉默GRP94對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲遷移的影響并探討其可能機(jī)制,有助于發(fā)現(xiàn)GRP94與乳腺癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系,為尋找新的乳腺癌治療靶點(diǎn)、乳腺癌的預(yù)防與治療提供理論依據(jù)。Wnt/β-catenin信號(hào)通路的眾多成員都參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程,研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)在乳腺癌中異常活躍,且協(xié)同TGFp信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲遷移等重要過(guò)程,本研究通過(guò)沉默GRP94表達(dá),進(jìn)一步探討GRP94與Wnt/β-catenin信號(hào)通路之間的聯(lián)系,進(jìn)而闡釋GRP94在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要作用。方法1. Real-time PCR、Western blot分別在mRNA與蛋白水平檢測(cè)GRP94在乳腺上皮細(xì)胞MCF10A、乳腺癌MCF7、MDA-MB-231、BT474及SK-BR-3細(xì)胞株中的表達(dá)。2.采用RNAi靶向沉默技術(shù),在乳腺癌MCF7細(xì)胞株中沉默GRP94基因表達(dá),觀察其對(duì)MCF7細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲遷移的影響,并通過(guò)Western blot分別檢測(cè)相關(guān)分子的表達(dá)。3.Western blot檢測(cè)Wnt/p-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵分子及相關(guān)靶基因的表達(dá)。結(jié)果1.GRP94在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)顯著增高,且在MCF7細(xì)胞中表達(dá)最高(P0.05)。2.在MCF7細(xì)胞中,沉默GRP94表達(dá)后,細(xì)胞周期阻滯在G1/S期,細(xì)胞增殖、克隆形成能力受到明顯抑制,促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,細(xì)胞侵襲遷移能力減弱,MMP2、MMP9及VEGF表達(dá)降低、E-cadherin表達(dá)明顯增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.沉默GRP94表達(dá)后,LRP6表達(dá)明顯降低,APC和Axin表達(dá)增高,提示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路被阻斷；細(xì)胞核及細(xì)胞漿中β-catenin表達(dá)明顯減少,β-catenin核轉(zhuǎn)位受到抑制,下游靶基因cyclin D1、c-myc表達(dá)減少。結(jié)論1.GRP94在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)顯著增高,且MCF7中表達(dá)最高。2.下調(diào)GRP94表達(dá)后,抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞增殖、侵襲遷移能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。3.下調(diào)GRP94表達(dá)可阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路,抑制β-catenin核轉(zhuǎn)位調(diào)控下游靶基因的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

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