【摘要】：目的:肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)占原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer,PLC)的90%以上,是世界上腫瘤死亡的主要原因之一,我國原發(fā)性肝癌的發(fā)病率、死亡率均占全世界的50%以上,提高肝癌的早期診斷率和進(jìn)一步開發(fā)治療肝癌的有效藥物,對于改善肝癌患者的預(yù)后和生活質(zhì)量是非常有必要;miRNA異常表達(dá)于各種惡性腫瘤中,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān);當(dāng)前研究顯示miR-429在不同腫瘤中的表達(dá)水平和作用有明顯差異,提示miR-429作為一個(gè)原癌或抑癌miR,與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),對腫瘤的診斷、治療和預(yù)后有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值;本實(shí)驗(yàn)通過檢測肝癌中miR-429的表達(dá)情況,研究了其對肝癌增殖、遷移的影響,分析其靶基因TRAF6的表達(dá)及對肝癌增殖、遷移的影響,通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究其在調(diào)節(jié)肝癌發(fā)生、發(fā)展中的關(guān)系。方法:1、臨床標(biāo)本和肝癌細(xì)胞系中采用Real time PCR檢測miR-429的表達(dá)情況;2、在體外實(shí)驗(yàn)中,使用miR-429慢病毒和對照組空白慢病毒miR-CON分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系SK-HEP1,然后采用MTT檢測miR-429對肝癌細(xì)胞系增殖能力的影響;利用wound healing和Transwell實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)miR-429對肝癌細(xì)胞系遷移能力的影響;3、運(yùn)用生物信息學(xué)、熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測miR-429的靶基因;4、采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、回復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測mi R-429與TRAF6的相互調(diào)控關(guān)系,采用免疫熒光、Western blot檢測miR-429在調(diào)控肝癌細(xì)胞增殖中的核心信號通路;5、采用裸鼠荷瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測miR-429對肝癌細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:1、通過Real time PCR檢測發(fā)現(xiàn),miR-429在肝癌組織中的表達(dá)水平明顯降低,在癌旁組織中miR-429的表達(dá)水平較肝癌組織增加1.47倍;通過Real time PCR檢測發(fā)現(xiàn),與正常肝細(xì)胞HL7702對比,肝癌細(xì)胞中mi R-429的表達(dá)明顯下調(diào),其中SK-HEP1的表達(dá)下調(diào)最為明顯。2、與轉(zhuǎn)染空白對照組miR-CON相比,miR-429抑制肝細(xì)胞系X椫澈蛻つ芰，

本文編號：2201640