【摘要】：目的:肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)占原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer,PLC)的90%以上,是世界上腫瘤死亡的主要原因之一,我國原發(fā)性肝癌的發(fā)病率、死亡率均占全世界的50%以上,提高肝癌的早期診斷率和進一步開發(fā)治療肝癌的有效藥物,對于改善肝癌患者的預后和生活質量是非常有必要;miRNA異常表達于各種惡性腫瘤中,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關;當前研究顯示miR-429在不同腫瘤中的表達水平和作用有明顯差異,提示miR-429作為一個原癌或抑癌miR,與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關,對腫瘤的診斷、治療和預后有潛在臨床應用價值;本實驗通過檢測肝癌中miR-429的表達情況,研究了其對肝癌增殖、遷移的影響,分析其靶基因TRAF6的表達及對肝癌增殖、遷移的影響,通過體內外實驗進一步探究其在調節(jié)肝癌發(fā)生、發(fā)展中的關系。方法:1、臨床標本和肝癌細胞系中采用Real time PCR檢測miR-429的表達情況;2、在體外實驗中,使用miR-429慢病毒和對照組空白慢病毒miR-CON分別轉染肝癌細胞系SK-HEP1,然后采用MTT檢測miR-429對肝癌細胞系增殖能力的影響;利用wound healing和Transwell實驗檢驗miR-429對肝癌細胞系遷移能力的影響;3、運用生物信息學、熒光素酶報告實驗檢測miR-429的靶基因;4、采用質粒轉染、回復實驗檢測mi R-429與TRAF6的相互調控關系,采用免疫熒光、Western blot檢測miR-429在調控肝癌細胞增殖中的核心信號通路;5、采用裸鼠荷瘤體內實驗檢測miR-429對肝癌細胞增殖的影響。結果:1、通過Real time PCR檢測發(fā)現(xiàn),miR-429在肝癌組織中的表達水平明顯降低,在癌旁組織中miR-429的表達水平較肝癌組織增加1.47倍;通過Real time PCR檢測發(fā)現(xiàn),與正常肝細胞HL7702對比,肝癌細胞中mi R-429的表達明顯下調,其中SK-HEP1的表達下調最為明顯。2、與轉染空白對照組miR-CON相比,miR-429抑制肝細胞系X椫澈蛻つ芰，

本文編號：2201640